[發明專利]用于奶牛乳房炎病原體快速分型檢測的探針組合

在審

• 申請號: 201810326054.5
• 申請日: 2018-04-12
• 公開（公告）號: CN108411013A
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發明（設計）人: 張菁華;黃超杰;唐愛發;吳誠龍;王翰;楊剛;鐘遠堂
• 申請（專利權）人: 深圳市第二人民醫院
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C40B40/06
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281
• 代理人: 向武橋;彭家恩

本發明公開了一種用于奶牛乳房炎病原體快速分型檢測的探針組合，包括：用于檢測致病性細菌的寡核苷酸探針，其序列如SEQ ID NO:3所示；用于檢測致病性真菌的寡核苷酸探針，其序列如SEQ ID NO:6所示；用于檢測致病性支原體的寡核苷酸探針，其序列如SEQ ID NO:9所示。本發明能夠采用多重實時熒光PCR技術，針對于細菌性致病菌、真菌性致病菌、支原體屬致病菌分別設計通用引物和探針，囊括引起奶牛乳房炎所有相關致病菌類型，可以實現對奶牛乳房炎病原微生物進行快速的類型分型，為后期精準檢測提供數據支撐，可以用于奶牛乳房炎的早期篩查和分子流行病學研究、相關疾病防治等。

技術領域

本發明屬于體外核酸檢測領域，尤其是涉及一種基于多重熒光PCR法快速分型檢測奶牛乳房炎病原體的探針組合及試劑盒。

背景技術

我國是一個農業大國、同時也是一個畜牧業生產大國，然而，我國奶業水平與其他發達國家相比還很落后，在畜牧業現代化國家，奶業產值占畜牧業產值的比例都比較高，美國為23％，日本為25％，法國、英國和德國都在30％～40％，而我國目前的奶業產值僅占畜牧業產值的5％，說明我國奶業仍處于一個發展階段。2014年我國奶牛年末存欄數達到1460萬頭。

奶牛乳房炎是危害世界奶牛養殖業的主要疾病之一，也是造成經濟損失最大的疾病，同時也是一個世界性的難題，根據國際奶牛聯合會的統計，奶牛臨床型乳房炎的發病率是2％，隱性乳房炎患病率為50％，據調查顯示我國的奶牛臨床型乳房炎的發病率高達5％，隱性乳房炎患病率為50％-70％。

奶牛乳房炎有很多危害，第一、造成奶產量的損失，有調查顯示包括即安康奶牛在內的經產牛群因隱性乳房炎所造成的平均損失為總產奶量的7.65％，每頭隱性乳房炎奶牛平均日產量減少3.7kg；第二、影響生鮮乳成分和乳制品質量，奶牛發生乳房炎后，鮮奶的成分會發生顯著變化，其營養和食用價值均顯著下降，乳房炎奶牛的鮮奶中乳糖、乳脂和鈣等營養成分下降高達50％以上；第三、增加牛群更替成本，因乳房炎導致奶牛提前被淘汰，增加奶牛的培養周期；第四、增加獸醫治療和管理成本；第五、威脅人類的身體健康，奶牛乳房炎主要是由病原微生物感染而發生的，如果牛奶在加工過程中滅菌不合格，就會對人們的身體造成很大的傷害，比如金黃色葡萄球菌可以產生毒素，該毒素可以抵抗高溫和干燥，一旦牛奶中含有金黃色葡萄球菌過量，就會引起人的腹瀉、嘔吐等。

引起奶牛乳房炎的原因有很多，但主要是由病原微生物感染引起的，同時也與奶牛自身因素和環境因素有關。目前己發現可以引起奶牛乳房炎的病原微生物主要包括細菌、支原體、真菌、病毒等。奶牛乳房炎病原微生物按感染和微生物分布特點可分為接觸傳染性病原微生物、環境病原微生物等兩大類型，其中，接觸傳染性病原微生物主要包括金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌、牛支原體、牛棒狀桿菌等，它們可從感染區擴散到未感染區，并傳染到其他奶牛，可以在擠奶過程中，通過擠奶機、擠奶工、擦洗乳房的抹布等途徑在奶牛間傳播擴散；環境性病原微生物主要包括大腸桿菌、克雷伯氏菌屬、腸球菌屬、原壁菌屬、粘質沙雷氏菌、化膿隱秘桿菌、變形桿菌屬、念珠菌等，主要來源于奶牛生活環境，如墊料、糞便、灰塵、泥土和飼料等，在擠奶間隔期間，當乳頭接觸污泥、糞便和牛床上的污物時，這類病原菌就進入乳腺，導致乳房感染。