[發明專利]一種積累幾丁寡糖重組枯草芽孢桿菌及其應用在審
| 申請號： | 201810325444.0 | 申請日： | 2018-04-12 |
| 公開（公告）號： | CN108531436A | 公開（公告）日： | 2018-09-14 |
| 發明（設計）人： | 劉龍;堵國成;陳堅;凌美希;李江華;劉延峰 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12P19/26;C12R1/125 |
| 代理公司： | 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211 | 代理人： | 張勇 |
| 地址： | 214122 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 幾丁寡糖 枯草芽孢桿菌 重組枯草芽孢桿菌 積累 乙酰氨基葡萄糖 遺傳工程領域 基因工程菌 糖基轉移酶 編碼基因 表達宿主 代謝工程 根瘤菌 脈根 三糖 四糖 五糖 應用 改造 生產 | ||
1.一種積累幾丁寡糖的重組枯草芽孢桿菌，其特征在于，表達百脈根根瘤菌來源的N-乙酰氨基葡萄糖糖基轉移酶。
2.根據權利要求1所述的重組枯草芽孢桿菌，其特征在于，所述N-乙酰氨基葡萄糖糖基轉移酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根據權利要求1或2所述的重組枯草芽孢桿菌，其特征在于，采用載體pP43NMK表達N-乙酰氨基葡萄糖糖基轉移酶。
4.一種構建權利要求1～3任一所述的重組枯草芽孢桿菌的方法，其特征在于，包括如下步驟：
1)構建重組質粒：克隆百脈根根瘤菌來源的N-乙酰氨基葡萄糖糖基轉移酶編碼基因nodC，連接到重組表達質粒上；
2)構建產幾丁寡糖重組枯草芽孢桿菌：將步驟1)構建的重組表達質粒轉化至枯草芽孢桿菌宿主細胞中，得到產幾丁寡糖重組枯草芽孢桿菌。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，編碼所述N-乙酰氨基葡萄糖糖基轉移酶的基因如SEQ ID NO.2所示；所述枯草芽孢桿菌宿主細胞為Bacillus subtilis 168；所述重組表達質粒為pP43NMK。
6.一種生產幾丁寡糖的方法，其特征在于，應用權利要求1～3任一所述重組枯草芽孢桿菌進行發酵。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述發酵是在35～37℃發酵36～54h。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，將35～37℃、200～220rpm下培養10～16h的重組枯草芽孢桿菌以按體積計3～5％的接種量轉入發酵培養基，于35～37℃發酵36～54h。
9.一種提高枯草芽孢桿菌積累幾丁寡糖能力的方法，其特征在于，表達百脈根根瘤菌來源的N-乙酰氨基葡萄糖糖基轉移酶。
10.權利要求1～3任一所述的重組枯草芽孢桿菌在食品、醫藥、化工領域發酵制備產品中的應用。
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