[發明專利]一種檢測組蛋白乙酰轉移酶活性的電化學法拉第籠免疫傳感器的構建方法及應用

有效

• 申請號: 201810323693.6
• 申請日: 2018-04-03
• 公開（公告）號: CN108593751B
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 胡宇芳;張青青;徐利華;王嬌;饒家佳;郭智勇;王邃
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: G01N27/48
• 分類號: G01N27/48;G01N33/535
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種檢測組蛋白乙酰轉移酶活性的電化學法拉第籠免疫傳感器的構建方法及應用，特點是包括以下步驟：(1)peptide/Au的制備：分別取乙酰轉移酶p300與多肽、乙酰輔酶A在PBS(0.1M，pH 7.0)中充分混合，于恒溫水浴鍋中孵育。取催化反應液滴涂于金電極表面，4℃冰箱中孵育；(2)MBAuNPs@GO?Ab的制備：將HAuCl₄，CTAB與水混合，向反應混合物中加入抗壞血酸，然后加入NaOH，得到CTAB覆蓋的AuNPs，離心、純化后分散在等量水中，再向溶液中加入GO超聲分散，靜置備用，隨后加入乙酰基抗體孵育，最后加入MB震蕩混合均勻；(3)電化學法拉第籠免疫傳感器的制備：取MBAuNPs@GO?Ab滴涂于peptide/Au表面，室溫下孵育，隨后將制得的傳感器置于PBS(0.1M，pH 7.0)中進行電化學SWV測試。

技術領域

本發明涉及電化學免疫傳感器，尤其是涉及檢測組蛋白乙酰轉移酶活性的電化學法拉第籠免疫傳感器的構建方法及其在生物環境中的檢測應用，屬于功能材料和生物傳感技術領域。

背景技術

癌癥，也被稱為惡性腫瘤，是當今人類社會的三大疾病之一，對人類健康的影響日趨顯著。盡管關于惡性腫瘤的研究已經取得令人鼓舞的進展，但是關于惡性腫瘤的預防和治療卻不甚完善，還需要多學科交叉結合發展，進行深層次的研究。因此，發展新型的分析傳感方法及平臺，快速、高靈敏、多通道地動態監測癌癥相關標志物及其發生發展過程，為癌癥的預防、診斷、治療以及預后執行提供方向。翻譯后修飾(PTM)是細胞對蛋白質實行復雜調控和信息傳遞的基礎，它不僅影響蛋白質的高級結構和生物活性，還調節其亞細胞定位、代謝周期以及與其它大分子物質的相互作用，癌癥的發生發展與PTM密切相關。目前PTM相關酶分析方法主要集中于蛋白激酶，而對蛋白質乙酰化相關酶研究較少。2010年，Science雜志聚焦報道了乙酰化對代謝通路及代謝酶活性的調節，科學家們逐漸深入研究蛋白質乙酰化相關酶。組蛋白乙酰化反應多發生在核心組蛋白氨基酸堿性氨基酸集中區的特定賴氨酸殘基上，其基本原理是將乙酰輔酶A(Ac-CoA)的乙酰基轉移到賴氨酸的NH₃⁺上。組蛋白乙酰化水平是由組蛋白乙酰化轉移酶(HAT)和去乙酰化酶(HDAC)協調決定的。乙酰化轉移酶通過在組蛋白的氨基端賴氨酸殘基上引入中性的乙酰基，使組蛋白與DNA間的空間位阻增大、靜電引力減小，導致兩者間親和作用減弱，DNA易于解凝聚，染色質表現出具有活性的轉錄結構，有利于DNA模板與轉錄因子親和，激活基因轉錄；相反，去乙酰化酶催化的去乙酰化作用，使帶負電的DNA與帶正電的組蛋白緊密結合，染色質表現出卷曲致密的阻抑結構，抑制基因轉錄，組蛋白的乙酰化行使染色質轉錄調控的開關功能。異常的組蛋白乙酰化/去乙酰化修飾影響到惡性腫瘤細胞生長、分化、凋亡、增殖相關基因的調控，從而往往導致惡性腫瘤的發生、增殖。因此，研究乙酰化相關酶活性對于理解癌癥成因和進展具有重要的意義。此外，臨床試驗研究發現，乙酰化相關酶抑制劑對多種惡性腫瘤細胞有明顯的抑制增殖和促進凋亡的作用，可以選擇性地高效殺傷腫瘤細胞，在癌癥治療中具有誘人的前景。同時，組蛋白乙酰化修飾與疾病狀態及化療效應緊密相關，可以通過賴氨酸的乙酰化程度跟蹤和判斷癌癥相關生理進程，如高復發風險、預后治療和獨立預測因子等。總之，乙酰化作用及修飾對腫瘤的篩查、診斷、治療和預防方面有著重要的指導意義，基于乙酰化相關酶活性進行抗腫瘤藥物的設計與篩選，為抗癌藥物的開發和疾病治療手段的發展提供了新方向。