[發(fā)明專利]一種檢測組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶活性的電化學(xué)法拉第籠免疫傳感器的構(gòu)建方法及應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810323693.6 | 申請日： | 2018-04-03 |
| 公開（公告）號： | CN108593751B | 公開（公告）日： | 2021-03-26 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 胡宇芳;張青青;徐利華;王嬌;饒家佳;郭智勇;王邃 | 申請（專利權(quán)）人： | 寧波大學(xué) |
| 主分類號： | G01N27/48 | 分類號： | G01N27/48;G01N33/535 |
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| 地址： | 315211 浙江省*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 檢測 組蛋白 乙酰 轉(zhuǎn)移酶 活性 電化學(xué) 法拉第 免疫 傳感器 構(gòu)建 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種檢測組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶活性的電化學(xué)法拉第籠免疫傳感器的構(gòu)建方法，其特征在于該電化學(xué)法拉第籠免疫傳感器通過以下方法構(gòu)建的：
首先，制備多肽/金電極peptide/Au：分別取乙酰轉(zhuǎn)移酶p300與多肽、乙酰輔酶A在磷酸緩沖溶液PBS中充分混合，于恒溫水浴鍋中孵育，獲得催化反應(yīng)液，取催化反應(yīng)液滴涂于金電極表面，4℃冰箱中孵育；其次，制備亞甲基藍(lán)固化的納米金/石墨烯/乙酰基抗體復(fù)合材料MBAuNPs@GO-Ab：將氯金酸HAuCl4，十六烷基三甲基溴化銨CTAB與水混合，向反應(yīng)混合物中加入抗壞血酸，然后加入NaOH，得到十六烷基三甲基溴化銨CTAB覆蓋的納米金AuNPs，離心、純化后分散在等量水中，即得納米金AuNPs溶液；再向溶液中加入氧化石墨烯GO超聲分散，靜置備用，即得納米金AuNPs/氧化石墨烯復(fù)合材料AuNPs@GO溶液，隨后加入乙酰基抗體孵育，最后加入亞甲基藍(lán)MB震蕩混合均勻，即得亞甲基藍(lán)固化的納米金/石墨烯/乙酰基抗體復(fù)合材料MBAuNPs@GO-Ab溶液；最后制備電化學(xué)法拉第籠免疫傳感器：取亞甲基藍(lán)固化的納米金/石墨烯/乙酰基抗體復(fù)合材料溶液MBAuNPs@GO-Ab滴涂于多肽/金電極peptide/Au表面，室溫下孵育，隨后將制得的傳感器置于磷酸緩沖溶液PBS中進(jìn)行方波伏安法SWV測試；
其中磷酸緩沖溶液PBS濃度為0.1M，pH＝7.0。
2.如權(quán)利要求1所述的電化學(xué)法拉第籠免疫傳感器的構(gòu)建方法，其特征是，制備多肽/金電極peptide/Au的具體方法是：分別取乙酰轉(zhuǎn)移酶p300與底物多肽，乙酰輔酶A在磷酸緩沖溶液PBS中充分混合，總體積10μL；將反應(yīng)液置于25～35℃恒溫水浴鍋中孵育15～45min；取乙酰轉(zhuǎn)移酶p300催化反應(yīng)液3～7μL，滴涂于金電極表面，4℃冰箱中孵育4～10h；
其中，乙酰轉(zhuǎn)移酶p300的濃度為50～150nM，用量1～3μL；
底物多肽的濃度為0.5～1.5mM，用量0.2～1.6μL；
乙酰輔酶A的濃度0.5～1.5mM，用量0.5～1.5μL；
磷酸緩沖溶液PBS濃度為0.1M，pH＝7.0。
3.如權(quán)利要求1所述的電化學(xué)法拉第籠免疫傳感器的構(gòu)建方法，其特征是，合成納米金AuNPs溶液的具體方法是：將氯金酸HAuCl4，十六烷基三甲基溴化銨CTAB與6.05～10.55mL水混合，向反應(yīng)混合物中加入抗壞血酸，然后加入氫氧化鈉；將溶液輕輕旋轉(zhuǎn)10s，靜置1～3h，得到十六烷基三甲基溴化銨CTAB包覆的納米金AuNPs，7000rpm離心8～12min，純化后分散在等量水中，即得納米金AuNPs溶液；
其中，氯金酸HAuCl4濃度為0.01～0.1M，用量0.025～0.25mL；
十六烷基三甲基溴化銨CTAB濃度為0.1～0.5M，用量0.2～1mL；
抗壞血酸濃度為0.05～0.5M，用量0.02～0.2mL；
氫氧化鈉濃度為0.05～0.5M，用量0.02～0.2mL。
4.如權(quán)利要求3所述的電化學(xué)法拉第籠免疫傳感器的構(gòu)建方法，其特征是，制備納米金/氧化石墨烯復(fù)合材料AuNPs@GO溶液的具體方法是：取0.5～5mg氧化石墨烯GO加入到0.5～5mL納米金AuNPs溶液中，超聲分散2～6h，隨后靜置0.5～3.5h備用，即得納米金AuNPs/氧化石墨烯復(fù)合材料AuNPs@GO溶液。
5.如權(quán)利要求4所述的電化學(xué)法拉第籠免疫傳感器的構(gòu)建方法，其特征是，制備亞甲基藍(lán)固化的納米金/石墨烯/乙酰基抗體復(fù)合材料MBAuNPs@GO-Ab溶液的具體方法是：取AuNPs@GO溶液5～15μL，加入乙酰基抗體Ab，30～40℃下孵育2～6h，再加入亞甲基藍(lán)MB混合震蕩0.5～1.5h，即得亞甲基藍(lán)固化的納米金/石墨烯/乙酰基抗體復(fù)合材料MBAuNPs@GO-Ab溶液；
其中，乙酰基抗體Ab濃度為0.5×10-3～1.5×10-3mg/L，用量2.5～7.5μL；
亞甲基藍(lán)MB濃度為0.05～0.2mM，用量2.5～7.5μL。
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