[發明專利]一種通過冷凍干燥濃縮質粒的方法

有效

• 申請號: 201810323393.8
• 申請日: 2018-04-05
• 公開（公告）號: CN108531476B
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發明（設計）人: 周晨妍;蔡劉滕子;張米帥;邵天賜;何優;宋兆祥;王朝陽;馬振武
• 申請（專利權）人: 新鄉醫學院
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 西安研創天下知識產權代理事務所(普通合伙) 61239
• 代理人: 陳明星

本發明公開了一種通過冷凍干燥濃縮質粒的方法，包括以下步驟：按照小提質粒試劑盒要求提取質粒，最終用100μLddH₂O洗脫到1.5mL EP管中；使用超微量分光光度計NANO DROP測量質粒濃度；將測量好的質粒打開蓋子封上一層封口膜，放入真空冷凍干燥機中冷凍干燥；同一種質粒用定量的ddH₂O重溶，保證雙蒸水充分接觸到干燥后質粒液體形成的薄膜，且完全將該薄膜溶解；用超微量分光光度計NANO DROP測量質粒濃度；對比冷凍干燥前后質粒體，濃度和質量的變化，整理數據，統計前后質粒濃度體積變化的規律。本發明的方法穩定性強，該方法也同樣適用于其他濃度較低的核酸產物的濃縮。

技術領域

本發明屬于生物業技術領域，涉及一種通過冷凍干燥濃縮質粒的方法。

背景技術

分子生物學技術中一些環節，如：雙酶切、核酸回收、連接等對目的質粒濃度要求較高，但是用柱式質粒DNA小量抽提試劑盒中提取質粒的過程中，常常由于質粒自身的低拷貝數、洗脫液用量不易掌控(洗脫液用量過大會導致濃度較小；洗脫液用量過小致使洗脫效率降低)等因素，所得質粒濃度和量常常達不到理想標準，故需要對其進行濃縮。現有技術中，質粒濃縮過程中，成本高，易受污染，方法穩定性較差。

現實應用中，急需一種穩定性強，成本低，易操作且得率高的濃縮質粒的方法。

發明內容

本發明的目的在于，提出了一種通過冷凍干燥濃縮質粒的方法，該方法具有穩定性強，成本低，易操作且得率高的優點，適合推廣應用。

其技術方案如下：

一種通過冷凍干燥濃縮質粒的方法，包括以下步驟：

步驟1.按照小提質粒試劑盒要求提取質粒，菌液收集量3-5mL，最終用100μLddH₂O洗脫到經過121℃，30min高壓蒸汽滅菌處理的1.5mL EP管中；

步驟2.使用超微量分光光度計NANO DROP測量質粒濃度，記錄單位為ng/μL；測量過后蓋好蓋子放置-20℃冰箱冷凍處理1-2h；提前打開真空冷凍干燥機，使冷阱溫度下降至-55℃：

步驟3.將冷凍處理好的質粒移至超凈工作臺，打開蓋子封上一層封口膜，并將其余部分包裹好，用牙簽在封口膜上戳開3-4個小洞，防止質粒液體濺出，同時可以平衡管內外壓強，處理好質粒，此時冷阱溫度下降至-55℃，立即放入冷凍干燥機中，密封好干燥箱，關閉通氣閥門，打開真空泵，使干燥箱中壓強達到15Pa左右，冷凍干燥6h；

步驟4.6h之后取出，掀掉封口膜，蓋上蓋子，拿到超凈工作臺中，用定量的ddH₂O重溶同一種質粒，保證雙蒸水充分接觸到干燥后質粒液體形成的一層薄膜，且完全將該薄膜溶解；溶解后標記號，用超微量分光光度計NANO DROP測量質粒濃度，記錄單位為ng/μL；并記錄參數OD260/OD280；

步驟5.對比冷凍干燥前后質粒體積、濃度和質量的變化，整理數據，統計前后質粒濃度體積變化的規律。

進一步，步驟2中，如果洗脫液大于100μL，凍干時低壓沸騰過程會濺出封口膜，需分裝，使最終每個1.5mLEP管中溶液體積≤100μL。

進一步，步驟4中，參數OD260/OD280＝1.8。

本發明的有益效果為：

本發明通過冷凍干燥濃縮質粒的方法濃縮之后質粒序列未發生改變且沒有受到污染，說明該方法穩定性強，該方法也同樣適用于其他濃度較低的核酸產物的濃縮，本發明具有穩定性強，成本低，易操作且得率高的優點，適合推廣應用。

附圖說明

圖1是本發明實施例的流程示意圖。

具體實施方式

下面結合附圖和具體實施方式對本發明的技術方案作進一步詳細地說明。