[發明專利]一種通過冷凍干燥濃縮質粒的方法

有效

• 申請號: 201810323393.8
• 申請日: 2018-04-05
• 公開（公告）號: CN108531476B
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發明（設計）人: 周晨妍;蔡劉滕子;張米帥;邵天賜;何優;宋兆祥;王朝陽;馬振武
• 申請（專利權）人: 新鄉醫學院
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 西安研創天下知識產權代理事務所(普通合伙) 61239
• 代理人: 陳明星

1.一種通過冷凍干燥濃縮質粒的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1.按照小提質粒試劑盒要求提取質粒，菌液收集量3-5mL，最終用100μLddH₂O洗脫到經過121℃，30min高壓蒸汽滅菌處理的1.5mL EP管中；如果洗脫液大于100μL，凍干時低壓沸騰過程會濺出封口膜，需分裝，使最終每個1.5mLEP管中溶液體積≤100μL；

步驟2.使用超微量分光光度計NANO DROP測量質粒濃度，記錄單位為ng/μL；測量過后蓋好蓋子放置-20℃冰箱冷凍處理1-2h；提前打開真空冷凍干燥機，使冷阱溫度下降至-55℃；

步驟3.將冷凍處理好的質粒移至超凈工作臺，打開蓋子封上一層封口膜，并將其余部分包裹好，用牙簽在封口膜上戳開3-4個小洞，冷阱溫度下降至-55℃，立即放入冷凍干燥機中，密封好干燥箱，關閉通氣閥門，打開真空泵，使干燥箱中壓強達到15Pa，冷凍干燥6h；

步驟4.6h之后取出，掀掉封口膜，蓋上蓋子，拿到超凈工作臺中，用定量的ddH₂O重溶同一種質粒，保證雙蒸水充分接觸到干燥后質粒液體形成的一層薄膜，且完全將該薄膜溶解；溶解后標記號，用超微量分光光度計NANO DROP測量質粒濃度，記錄單位為ng/μL；并記錄參數OD260/OD280；參數OD260/OD280＝1.8；

步驟5.對比冷凍干燥前后質粒體積、濃度和質量的變化，整理數據，統計前后質粒濃度體積變化的規律。