[發明專利]一種用于檢測腎癌中囊性腎細胞癌亞型的基因檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201810323048.4
• 申請日: 2018-04-11
• 公開（公告）號: CN108410988A
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發明（設計）人: 蔣靈鋒
• 申請（專利權）人: 蔣靈鋒
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6858
• 代理公司: 南京匯盛專利商標事務所(普通合伙) 32238
• 代理人: 趙超

本發明公開了一種用于檢測腎癌中囊性腎細胞癌亞型的基因檢測試劑盒，含有用于檢測基因ENST00000547387在92bp～205bp位點完全甲基化的引物。囊性腎細胞癌原發灶中ENST00000547387在92bp～205bp位點完全甲基化，而囊性腎細胞癌癌旁正常組織和其他三種亞型的原發灶及癌旁正常組織均為非甲基化，因此可通過檢測ENST00000547387在92bp～205bp位點是否完全甲基化診斷囊性腎細胞癌亞型，特異性強，本實驗45例樣本的診斷準確率為100％。

技術領域

本發明屬于基因診斷領域，涉及用于檢測腎癌中囊性腎細胞癌亞型的基因檢測試劑盒。

背景技術

在臨床中，腎細胞癌(remahcellcarcinoma，RCC)的發病率逐年升高，已成為一種高發、常見的腎實質惡性腫瘤。既往研究顯示，該病多發于50～70歲年齡段人群，僅有約5％患者年齡為40歲以下，但近幾年，青年RCC患者的人數逐年增多。RCC腫瘤包含多個亞型，且各亞型間在病理表征及預后均存在不同差異性，早期對它們進行準確的病理學分型，能夠有效改善患者預后，提高抗癌治療效果及患者存活率(參考文獻：對比分析不同腎細胞癌亞型的臨床病理學特征，熱帶醫學雜志2016年11月第16卷第11期)。

但是，目前基本都是通過病理分析確定腎細胞癌的亞型，結果受臨床醫生的經驗影響較大，往往需要2～3名經驗豐富的臨床醫生才可確診。

長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNAs)曾經被認為不具有任何生物學功能，被稱為是基因組轉錄的“噪音”。然而，近年來研究發現這些“噪音”基因組可能發揮重要的生物學作用，并有研究證明，lncRNAs在各種疾病中都有異常表達，其中包括癌癥。研究認為lncRNAs的表達能夠通過DNA甲基化來調控，其啟動子區CpG島發生甲基化后，會抑制該基因的轉錄，如果抑癌基因啟動子區CpG島發生甲基化就很可能導致腫瘤的發生，并且不同位點的甲基化率不同，會對基因的沉默有一定的影響。

若能通過檢測不同腎細胞癌亞型之間及與正常腎組織之間的lncRNA是否甲基化以及甲基化位置的差異就可以對腎細胞癌進行診斷并分型，必然有助于腎細胞癌的確診。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種基因檢測試劑盒確定不同腎細胞癌亞型的方法，這種方法不依賴于臨床醫生的經驗，不受主觀因素影響。

本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：

一種診斷腎癌中透明細胞癌亞型的基因檢測試劑盒

一種診斷腎癌中透明細胞癌亞型的基因檢測試劑盒，含用于檢測基因ENST00000567236在10bp～175bp位點完全甲基化的引物。

優選地，所述引物的上游序列如Sequence NO.1所示，下游序列如Sequence NO.2所示。

優選地，還含有PCR反應所需酶和試劑。

一種診斷腎癌中透明細胞癌亞型的方法，包括如下步驟：

步驟S1，取腎癌患者原發灶組織于液氮保存備檢；

步驟S2，檢測前取出原發灶組織，采用酚/氯仿抽提法提取組織中總DNA；

步驟S3，取2μg總DNA用2mol/LNaOH變性處理，于10mmol/L氫醌和3mol/L亞硫酸氫鈉中50℃反應12～16h，處理后的DNA用WizardDNA純化試劑進行純化；

步驟S4，使用用于檢測基因ENST00000567236在10bp～175bp位點完全甲基化的引物對純化后的DNA進行PCR擴增，擴增產物經2％瓊脂糖凝膠電泳，用UV凝膠電泳成像及圖像分析系統進行圖像分析，若擴增出目的條帶則判定為透明細胞癌亞型。