[發(fā)明專利]特異性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的重組人Fc抗體及其制備方法、用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810319683.5
• 申請(qǐng)日: 2018-04-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108642070B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-03-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙洪禮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 沈陽(yáng)金石生物制藥有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/62
• 分類號(hào): C12N15/62;C12N15/81;C12N15/85;C07K19/00;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/18;A61K38/16;A61K47/64;A61P35/00;C12R1/84
• 代理公司: 沈陽(yáng)科威專利代理有限責(zé)任公司 21101
• 代理人: 王勇

本發(fā)明提供了一種特異性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的重組人Fc抗體及其制備方法、用途，其要點(diǎn)是：通過(guò)人工合成方法直接合成人IgG抗體的Fc片段的HC2和HC3區(qū)基因片段，同時(shí)合成能特異性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的VP3基因，構(gòu)建含F(xiàn)c?linker?VP3單鏈抗體基因；將上述基因片段亞克隆到pPIC9K載體并轉(zhuǎn)染畢赤酵母系統(tǒng)GS115菌株，或亞克隆到哺乳細(xì)胞表達(dá)載體及在哺乳細(xì)胞中表達(dá)重組的人Fc抗體蛋白；此重組人Fc抗體具有激活補(bǔ)體活性，引起ADCC作用，同時(shí)有很強(qiáng)的特異性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡作用，可用于惡性腫瘤的治療。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬抗體制藥及其在惡性腫瘤中的應(yīng)用，尤其是一種特異性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的重組人Fc抗體及其制備方法、及用該制備方法獲得的制品在惡性腫瘤治療中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

人體免疫系統(tǒng)是防御體內(nèi)各種疾病發(fā)生發(fā)展的重要器官，它擔(dān)負(fù)著免疫防御、免疫監(jiān)視、免疫耐受和免疫調(diào)節(jié)4大免疫功能?？贵w是執(zhí)行這4大功能的最重要分子之一?？贵w分子是機(jī)體受到抗原性物質(zhì)刺激后產(chǎn)生的免疫球蛋白，它可與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合并借助其它免疫功能將抗原清除掉，起到防病的重要作用?？贵w分子由4條肽鏈組成，有2個(gè)功能區(qū)構(gòu)成，即特異性結(jié)合抗原的氨基端，稱為F(ab＇)段，因抗原不同F(xiàn)(ab＇)段的分子結(jié)構(gòu)不同，又稱為可變區(qū)（V區(qū)）；和擔(dān)負(fù)免疫調(diào)節(jié)功能的羧基端，稱為Fc片段，同種生物的Fc片段是相對(duì)保守的，又稱為恒定區(qū)（C區(qū)）。根據(jù)恒定區(qū)的抗原性不同將抗體分為5個(gè)同種型，即IgM、IgG、IgA、IgD和IgE；即使是同一類Ig的分子結(jié)構(gòu)也有不同，據(jù)此又可將同類Ig分為不同亞類，如人IgG可分為IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。盡管抗體Fc片段不與抗原發(fā)生特異性結(jié)合，但在發(fā)揮免疫功能方面是不可或缺的。當(dāng)抗體V區(qū)與抗原發(fā)生結(jié)合后，必須借助C區(qū)的作用，在體外可發(fā)生各種抗原抗體結(jié)合反應(yīng)，有力于抗原或抗體的檢測(cè)和功能的判定，在體內(nèi)可中和毒素、阻斷病原入侵、清楚病原微生物等。Fc片段主要功能有：補(bǔ)體激活功能、結(jié)合Fc受體功能和穿過(guò)胎盤(pán)和粘膜功能?？贵w通過(guò)與Fc受體結(jié)合進(jìn)一步發(fā)揮免疫調(diào)理功能和抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（antibody-dependent dell-mediated cytotoxicity, ADCC）,ADCC作用是機(jī)體清楚病原體和腫瘤細(xì)胞的重要功能之一。人體內(nèi)的Fc受體分為3鐘，廣泛的分布于體內(nèi)各種免疫細(xì)胞和體細(xì)胞的表面，發(fā)揮著重要的免疫調(diào)節(jié)功能，同時(shí)抗體在體內(nèi)的半衰期起著重要作用。

近年來(lái)，隨著單克隆抗體技術(shù)和基因工程技術(shù)的快速發(fā)展，涌現(xiàn)出大量的人源化抗體、基因工程抗體和抗原結(jié)合的Fc融合蛋白，俗稱Fc抗體，（antigen-binding Fcproteins. Fcabs,）。這些抗體的研制成功為各種疑難雜癥提供了有力的精確診斷和精準(zhǔn)治療的手段，已有350多種抗體獲批應(yīng)用于臨床，每年獲得數(shù)百億元的經(jīng)濟(jì)效益。特別是出現(xiàn)了大量的針對(duì)腫瘤細(xì)胞的單克隆抗體或人源化抗體。但是目前臨床上所應(yīng)用的抗腫瘤抗體多為針對(duì)腫瘤細(xì)胞表面優(yōu)勢(shì)抗原的，如CD抗原系列，而非腫瘤細(xì)胞特異性抗原，因?yàn)槟壳澳茏C明的腫瘤特異性抗原寥寥無(wú)幾，這在很大程度上影響了抗體的治療效果，同時(shí)增加了抗體的毒副作用。目前在缺乏腫瘤特異性抗原的前提下，制備的抗腫瘤抗體總是有不足之處。另外目前抗體研制多注重V區(qū)的作用，而忽略了C區(qū)的功能。已上臨床的Fcabs類單抗制品均為抗原阻斷型，如用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的依那西普（Enbrel）,就是阻斷TNF受體而發(fā)揮治療作用，其中的抗體Fc段只起到穩(wěn)定蛋白和增加半衰期的作用，而沒(méi)有進(jìn)一步發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)功能。

眾所周知癌癥治療是世界性難題，目前常規(guī)的手術(shù)、放療、化療等方法還不能治愈癌癥，尋找更有效的治療手段一直是國(guó)際上重點(diǎn)研究領(lǐng)域之一。所以研發(fā)具有治療作用的新型生物制劑具有重要的社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì)意義。