[發(fā)明專利]一種檢測(cè)嘔吐毒素及其乙酰化衍生物的時(shí)間分辨熒光免疫層析卡

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810318997.3
• 申請(qǐng)日: 2018-04-11
• 公開（公告）號(hào): CN108614106A
• 公開（公告）日: 2018-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張海濤;張一平;龔燕;董曼佳;楊婷婷;王紅連;陸麗婷;華洵璐;秦海萍;葉進(jìn);匡群
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇省蘇微微生物研究有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/533
• 分類號(hào): G01N33/533;G01N33/577
• 代理公司: 無(wú)錫市大為專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32104
• 代理人: 時(shí)旭丹;張仕婷

一種檢測(cè)嘔吐毒素及其乙酰化衍生物的時(shí)間分辨熒光免疫層析卡，屬于免疫層析和食品安全檢測(cè)領(lǐng)域。本層析卡由樣品墊、標(biāo)記墊、硝酸纖維素膜、吸水濾紙和PVC底板組成。標(biāo)記墊固定有納米銪熒光微球標(biāo)記的嘔吐毒素單克隆抗體1和抗體2。抗體1對(duì)嘔吐毒素和15?乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇有高度特異性；抗體2對(duì)嘔吐毒素和3?乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇有高度特異性。本發(fā)明基于抗原抗體免疫學(xué)原理進(jìn)行檢測(cè)。本層析卡與便攜式時(shí)間分辨熒光免疫分析儀聯(lián)用，用于谷物及其制品中嘔吐毒素及其乙酰化衍生物總量的快速定量檢測(cè)，靈敏度高、穩(wěn)定性好；檢出限0.168 mg/kg，檢測(cè)范圍0.17～5 mg/kg，時(shí)間10～15min，操作簡(jiǎn)便，不需專業(yè)培訓(xùn)，廣泛適用于各種場(chǎng)合和不同層次人員的需要。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)嘔吐毒素及其乙酰化衍生物總量的時(shí)間分辨熒光免疫層析卡，具體涉及其制備方法和應(yīng)用于快速檢測(cè)的方法，屬于免疫層析技術(shù)領(lǐng)域和食品安全檢測(cè)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

嘔吐毒素又稱脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON，以下用英文簡(jiǎn)寫），屬單端孢霉烯族化合物，化學(xué)名稱為3α,7α,15-三羥基草鐮孢菌-9-烯-8-酮，其結(jié)構(gòu)為四環(huán)的倍半萜，分子式為C₁₅H₂₀O₆，分子量296.3。嘔吐毒素主要有兩種乙酰化的衍生物，分別為3-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(3-Ac-DON，以下用英文簡(jiǎn)寫)和15-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇( 15-Ac-DON，以下用英文簡(jiǎn)寫)；現(xiàn)有測(cè)定數(shù)據(jù)表明，這兩種乙酰化衍生物大約占谷物中總DON量的10％左右。

嘔吐毒素及其乙酰化衍生物，主要由鐮刀菌屬Fusarium的幾個(gè)種產(chǎn)生，尤其是禾谷鐮刀菌（Fusarium graminearum）和黃色鐮刀菌（Fusarium culmorum）。小麥、大麥、玉米等谷類作物，當(dāng)生長(zhǎng)或貯藏于潮濕高溫環(huán)境條件時(shí)，極易受此類菌的侵染，導(dǎo)致毒素劇增。

DON及其乙酰化衍生物的性質(zhì)穩(wěn)定，耐熱、耐壓、耐弱酸、耐儲(chǔ)藏，一般的食品加工不能破壞其結(jié)構(gòu)。人和動(dòng)物在誤食被此類毒素污染的食物后，會(huì)產(chǎn)生嘔吐、厭食、腹瀉、發(fā)燒、站立不穩(wěn)、反應(yīng)遲鈍、免疫抑制和血液病等毒性反應(yīng)。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)DON及其衍生物可能與人類食管癌、IgA腎病有關(guān)，有明顯細(xì)胞毒性、胚胎毒性和一定致畸作用，并可能有遺傳毒性。最新的動(dòng)物研究表明，DON 及其衍生物可以和其他真菌毒素產(chǎn)生聯(lián)合作用，加劇動(dòng)物肝、腎臟細(xì)胞膜損傷和氧化損傷，導(dǎo)致動(dòng)物過(guò)早死亡。

DON已被聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織（FAO）和世界衛(wèi)生組織（WHO）確定為最危險(xiǎn)的自然發(fā)生食品污染物之一；在1998年國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)公布的評(píng)價(jià)報(bào)告中，被列為三類致癌物。國(guó)際食品添加劑聯(lián)合專家委員會(huì)（JECFA）認(rèn)為，兩種乙酰衍生物3-Ac-DON和15-Ac-DON的毒性與DON 相當(dāng)，在生物體消化系統(tǒng)內(nèi)可通過(guò)乙酰化基團(tuán)的水解，轉(zhuǎn)化為DON而誘導(dǎo)毒性，因此于2010年對(duì)DON及其乙酰衍生物總和的每日容許最大攝入量確定為1.0μg/kg/d。歐盟正在考慮將目前執(zhí)行的單一DON限量標(biāo)準(zhǔn)修訂為DON及其衍生物（包括隱蔽型）之和。因此跟蹤國(guó)際新標(biāo)準(zhǔn)，將我國(guó)現(xiàn)行食品中針對(duì)DON單一限量修訂為DON及其衍生物之和為大勢(shì)所趨。需特別指出的是，我國(guó)于2014年國(guó)家食品安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)計(jì)劃中，已明確要求檢測(cè)小麥粉、燕麥（含燕麥片）、嬰幼兒谷物類輔助食品中的DON、3-Ac-DON和15-Ac-DON三種化合物。

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB5009.111-2016中規(guī)定了采用同位素稀釋液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定谷物及食品中DON、3-Ac-DON和15-Ac-DON的含量。國(guó)家出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T3137-2012中規(guī)定了采用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法檢測(cè)出口食品中DON、3-Ac-DON和15-Ac-DON的含量。色譜法具有準(zhǔn)確度、精密度和靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)，但儀器昂貴、樣品前處理復(fù)雜、成本高、不能現(xiàn)場(chǎng)操作，對(duì)操作人員要求高。