[發(fā)明專利]鹽藻純化分離方法及微藻純化分離方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810317606.6
• 申請日: 2018-04-10
• 公開（公告）號: CN108220167A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發(fā)明（設計）人: 李炳乾;張云澤;劉穎芬;辛乃宏;張禮;鄭秀潔;王莘;潘娟
• 申請（專利權）人: 中鹽工程技術研究院有限公司;天津濱海索爾特生物技術中心有限公司
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12N1/02;C12R1/89
• 代理公司: 天津濱海科緯知識產(chǎn)權代理有限公司 12211
• 代理人: 薛萌萌

本發(fā)明屬于微藻養(yǎng)殖技術領域，尤其涉及一種鹽藻純化分離方法及微藻純化分離方法。它是在低濃度瓊脂凝固前將待分離純化的鹽藻細胞放入其中，混勻后倒入培養(yǎng)皿中，凝固后置于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待單個鹽藻細胞生長為細胞團時，將其挑出單獨培養(yǎng)。本方法操作簡單，成功率高，且不需要專業(yè)人員即可完成，為實驗和生產(chǎn)鹽藻提供純化的藻種具有重要意義。

技術領域

本發(fā)明屬于微藻養(yǎng)殖技術領域，尤其是涉及一種鹽藻純化分離方法及微藻純化分離方法。

背景技術

鹽藻是鹽生杜氏藻的簡稱，是一種真核藻類，可在飽和氯化鈉的極端高鹽環(huán)境下(NaCl濃度高于30％)生長，在一定條件下，鹽藻體內β-胡蘿卜素可高達8％～10％(干重)，并富含30％左右甘油和30％～40％蛋白質以及脂肪酸、葉綠素和四烯油等，β-胡蘿卜素營養(yǎng)價值極高，國內外已廣泛用于醫(yī)藥、食品中。鹽藻體內營養(yǎng)物質的積累不僅與培養(yǎng)條件有關，而且與鹽藻的品系也有很大的關系。鹽藻在養(yǎng)殖一段時間后容易老化也容易感染其他生物，因此，需要定期進行鹽藻的分離和純化才能滿足生產(chǎn)上的需要。

目前，鹽藻的分離純化主要采用其他微藻的分離純化方法，有稀釋水滴分離法、涂布法和微細管分離法。稀釋水滴分離法操作簡單，需要進行大量重復操作培養(yǎng)，且成功率極低；鹽藻產(chǎn)生β-胡蘿卜素的重要條件之一就是培養(yǎng)基鹽度較高，涂布法會導致固體培養(yǎng)基在鹽藻生長起來前有鹽析出甚至干掉。微細管分離法針對性高，但操作難度大，且鹽藻有鞭毛可以游動，增加了其分離難度。

發(fā)明內容

有鑒于此，本發(fā)明旨在提出一種鹽藻純化分離方法，以解決現(xiàn)有的分離純化方法需要大量重復操作培養(yǎng)、且成功率極低，或者在鹽藻生長起來前有鹽析出、甚至干掉，及操作難度大、分離難度大等問題。

為達到上述目的，本發(fā)明的技術方案是這樣實現(xiàn)的：

一種鹽藻純化分離方法，采用固體培養(yǎng)基與待分離純化的鹽藻細胞混合的方式對鹽藻純化分離。

作為一種進一步的技術方案，鹽藻純化分離方法，采用瓊脂濃度為0.7～1.2％的固體培養(yǎng)基，35～45℃條件下，混入待分離純化的鹽藻細胞。

作為一種優(yōu)選的技術方案，每1000mL0.7～1.2％濃度的瓊脂培養(yǎng)基在35～45℃時加入1×10³～1×10⁵個鹽藻細胞。

作為一種進一步的技術方案，鹽藻純化分離方法，具體包括如下步驟：

步驟一：按固體培養(yǎng)基配方比例稱量各組分，加入除維生素外的營養(yǎng)鹽，高溫高壓滅菌；

步驟二：滅菌完成后置于超凈工作臺中，待溫度降至50～60℃時加入維生素，混勻；

步驟三：待培養(yǎng)基溫度降至35～45℃時，加入待分離純化的鹽藻細胞，混勻；

步驟四：將培養(yǎng)基倒入已滅菌過的培養(yǎng)皿中，冷卻后用封口膜密封；

步驟五：將培養(yǎng)皿置于28～35℃，光照強度3000～10000lx，光暗比L：D＝14h：10h條件下，讓鹽藻細胞生長繁殖；

步驟六：培養(yǎng)20～35天后，鹽藻在固體培養(yǎng)基中均勻分布多個細胞團，將單個細胞團取出單獨培養(yǎng)。

作為一種優(yōu)選的技術方案，步驟一及步驟四中高溫高壓滅菌條件為：102.9kPa，121～126℃，20～30min。

作為一種進一步的技術方案，步驟六中用接種環(huán)或微型鑷子將單個細胞團取出放入鹽藻液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

作為一種進一步的技術方案，步驟六中單個細胞團取出放入鹽藻液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)條件為：28～35℃，光照強度3000～10000lx，光暗比L：D＝14h：10h。