[發明專利]檢測馬鈴薯M病毒用的引物、試劑盒及方法

在審

• 申請號: 201810317468.1
• 申請日: 2018-04-10
• 公開（公告）號: CN108300810A
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發明（設計）人: 陳定虎
• 申請（專利權）人: 陳定虎
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 中山市興華粵專利代理有限公司 44345
• 代理人: 吳劍鋒

本發明公開了一種檢測馬鈴薯M病毒用的引物、試劑盒及方法，其中引物包括PVM?F3；PVM?B3；PVM?FIP；PVM?BIP。本發明的目的是為了克服現有技術中的不足之處，提供一種快速、簡便、高效、準確性高、特異性強、靈敏性高，馬鈴薯X病毒RT?LAMP檢測用的引物；本發明另一個目的是提供一種包含上述引物的用于檢測馬鈴薯M病毒的試劑盒；本發明另一個目的是提供一種采用上述馬鈴薯M病毒RT?LAMP檢測方法。

技術領域

本發明涉及一種馬鈴薯M病毒RT-LAMP鑒定用的引物、試劑盒及檢測方法，屬于生物技術領域。

背景技術

馬鈴薯M病毒potato virus M,PVM發現于美國、法國、英國、德國、荷蘭等國家,目前,PVM在世界各地均有發生[1]。PVM是香石竹潛隱病毒屬Carlavirus成員。病毒粒體大小為650nmX12nm,有一個未完全封閉的病毒衣殼。致死溫度為65-71℃,體外保毒期為5-7d,稀釋限點為10²-10³。在寄主植物的任何部位都可檢測到病毒,病毒主要存在于細胞質中。發現在感病植物細胞的細胞質中可出現呈無定形的X體狀的內含體。該病毒基因組為單鏈正義RNA,長8535bp,其3'端有個Poly(A),5'端可能有一個甲基化的帽子結構,基因組RNA含有6個ORFs,編碼6個蛋白。PVM的RNA的ORFI編碼223kDa的復制酶；ORF2、ORF3和ORF4分別編碼一個25kDa、12kDa和7kDa蛋自,組成了一個三基因盒,參與病毒的胞間運動；ORF5編碼34kDa外殼蛋白；重疊的ORF6編碼11-16kDa富含半胱氨酸的蛋白,該產物的功能還不清楚,但從結合核酸的能力看,可能有助于蚜蟲傳播或者涉及寄主基因轉錄及病毒RNA的復制[1]。

PVM的自然寄主主要是茄科植物，包括馬鈴薯、番茄及人參果等，在實驗室中也可侵染覓色黎、昆諾黎、毛曼陀羅、千日紅、菜豆、番茄、豇豆等。該病毒可通過機械傳播、嫁接傳播也可通過節肢動物如蚜蟲的非持久性方式傳播,但不能通過種子和花粉傳播。侵染寄主后引起的典型癥狀為小葉皺縮扭曲斑駁和矮化。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有技術中的不足之處，提供一種快速、簡便、高效、準確性高、特異性強、靈敏性高，馬鈴薯M病毒RT-LAMP鑒定用的引物；

本發明另一個目的是提供一種包含上述引物的用于鑒定馬鈴薯M病毒的試劑盒；

本發明另一個目的是提供一種采用上述馬鈴薯M病毒RT-LAMP檢測方法。

為了達到上述目的，本發明采用以下方案：

一種馬鈴薯M病毒RT-LAMP鑒定用的引物，其特征在于包括：

PVM-F3:5’-TATGAGGACCGGTTCGCC-3’

PVM-B3:5’-GACCATTCATACCGCCAGTC-3’

PVM-FIP:5’-CGGGGTTGGTCGCCTTATCAG-TTACGTGGAGAACACTGCTG-3’

PVM-BIP:5’-AAGGACGTGGCTTTACGTGGT-ACCTCGGCATTAAGAGAGCT-3’。

一種馬鈴薯M病毒RT-LAMP鑒定用的試劑盒，其特征在于該試劑盒包括有：

如上所述的試劑盒，其特征在于所述的2×反應液緩沖液由以下組分組成：

如上所述的試劑盒，其特征在于所述的酶溶液為Bst DNA聚合酶和AMV逆轉錄酶混合液。

如上所述的任一種試劑盒，其特征在于熒光目視檢測試劑中含有鈣黃綠素熒光染料。