[發(fā)明專利]提高牛體外胚胎制備效率的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810316589.4
• 申請(qǐng)日: 2018-04-10
• 公開（公告）號(hào): CN108588007A
• 公開（公告）日: 2018-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李雪玲;韓雪潔;王晨;周正偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/073
• 分類號(hào): C12N5/073;C12N5/075;A61D19/00
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

本發(fā)明提供一種提高牛體外胚胎制備效率的方法，包括牛卵母細(xì)胞的體外采集、卵丘?卵母細(xì)胞復(fù)合體的體外成熟培養(yǎng)、牛卵母細(xì)胞的體外受精以及體外發(fā)育培養(yǎng)等步驟。其中，體外發(fā)育培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)液中含有0.01?70μM的C₃₅H₄₉F₂N₇O₄·CF₃CO₂H(MM102)。通過在體外條件下，選取最優(yōu)的牛體外受精體系，在牛體外受精發(fā)育48小時(shí)后，將卵裂球置于添加有不同濃度MM102的發(fā)育液中，結(jié)果顯示，MM102對(duì)牛的受精卵體外發(fā)育有促進(jìn)作用，可得到較高的囊胚率。該法可用于提高牛體外胚胎制備的效率。本發(fā)明可為家畜體外受精技術(shù)研究提供一定的理論依據(jù)，并可進(jìn)一步應(yīng)用于家畜繁殖和家畜遺傳保種等領(lǐng)域中。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種提高牛體外胚胎制備效率的方法。

背景技術(shù)

牛體外受精技術(shù)包括卵母細(xì)胞體外收集與成熟、精子體外獲能與精卵體外受精，及受精卵體外培養(yǎng)等過程。1977年，Iritane和Niwa獲得了世界首例體外受精牛。我國(guó)的體外受精研究開始于80年代后期，在前人研究的基礎(chǔ)上，我國(guó)的進(jìn)展很快。1989年，旭日干院士等成功培育出我國(guó)第一例體外受精牛。此后，范必勤、盧克煥、石德順等研究團(tuán)隊(duì)也先后獲得了體外受精牛。目前為止，由于胚胎體外生產(chǎn)技術(shù)的廣泛利用，大多數(shù)家養(yǎng)動(dòng)物的后代已經(jīng)成功獲得。牛雖是家畜體外受精中較早研究的動(dòng)物，但其生產(chǎn)效率卻不盡人意。

混合系白血病(MLL1)是一種H3K4甲基轉(zhuǎn)移酶，抑制MLL1酶的活性對(duì)于MLL1融合蛋白引起的急性白血病是一種新的治療策略。當(dāng)WDR/MLL蛋白相互作用時(shí)，MLL1酶才具有活性。MM102(C₃₅H₄₉F₂N₇O₄·CF₃CO₂H)是WDR/MLL蛋白相互作用的抑制劑。在白血病細(xì)胞表達(dá)MLL1-AF9融合基因時(shí)，抑制MLL1甲基轉(zhuǎn)移酶的活性和MLL1誘導(dǎo)的HoxA9和Meis-1基因的表達(dá)。目前，MM102在提高胚胎發(fā)育率方面還沒有研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種提高牛體外胚胎制備效率的方法。通過在體外受精后的胚胎發(fā)育過程中添加MM102，探究MM102對(duì)牛胚胎發(fā)育的影響，為家畜體外受精及提高囊胚率提供參考。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明提供的一種提高牛體外胚胎制備效率的方法，包括牛卵母細(xì)胞的體外采集、卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體的體外成熟培養(yǎng)、牛卵母細(xì)胞的體外受精以及體外發(fā)育培養(yǎng)等步驟。

其中，體外發(fā)育培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)液(IVC-2液)中含有0.01-70μM的C₃₅H₄₉F₂N₇O₄·CF₃CO₂H。優(yōu)選地，所述IVC-2液中含有30μM、50μM或70μM的C₃₅H₄₉F₂N₇O₄·CF₃CO₂H，更優(yōu)選50μM。

前述的方法，當(dāng)IVC-2液中含0μM的MM102時(shí)，囊胚率為24.33％。

前述的方法，當(dāng)IVC-2液中含30μM的MM102時(shí)，囊胚率為25.47％。

前述的方法，當(dāng)IVC-2液中含50μM的MM102時(shí)，囊胚率為32.61％，高于其他體系。

前述的方法，當(dāng)IVC-2液中含70μM的MM102時(shí)，囊胚率為29.65％。

前述的方法，當(dāng)MM102濃度在0-50μM之間時(shí)，隨著MM102濃度的增加，囊胚率逐漸上升，且囊胚形態(tài)正常。