[發明專利]提高牛體外胚胎制備效率的方法在審
| 申請號： | 201810316589.4 | 申請日： | 2018-04-10 |
| 公開（公告）號： | CN108588007A | 公開（公告）日： | 2018-09-28 |
| 發明（設計）人： | 李雪玲;韓雪潔;王晨;周正偉 | 申請（專利權）人： | 內蒙古大學 |
| 主分類號： | C12N5/073 | 分類號： | C12N5/073;C12N5/075;A61D19/00 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產權代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;黃爽 |
| 地址： | 010020 內蒙古自*** | 國省代碼： | 內蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 牛體 體外發育 制備 胚胎 牛卵母細胞 體外受精 受精 家畜 培養液 卵母細胞復合體 體外成熟培養 發育 受精卵 促進作用 技術研究 家畜繁殖 體外條件 卵裂球 囊胚率 保種 可用 卵丘 體外 采集 遺傳 應用 | ||
1.一種提高牛體外胚胎制備效率的方法，其特征在于，包括牛卵母細胞的體外采集、卵丘-卵母細胞復合體的體外成熟培養、牛卵母細胞的體外受精以及體外發育培養的步驟；
其中，體外發育培養所使用的培養液中含有0.01-70μM的C35H49F2N7O4·CF3CO2H。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，體外發育培養所使用的培養液中含有30μM、50μM或70μM的C35H49F2N7O4·CF3CO2H，優選50μM。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，體外發育培養所使用的培養液配方為：
其中，所述SOF液的配方為：
所述儲液A的配方為：
所述儲液B的配方為：
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，卵丘-卵母細胞復合體的體外成熟培養所使用的培養液配方為：
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，體外受精依次在A液和B液中進行，其中，A液配方為：體外受精儲液+10mM咖啡因，B液配方為：體外受精儲液+20mg/mL牛血清白蛋白+1IU/mL肝素；
其中，所述體外受精儲液的配方為：
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，將采集到的卵丘-卵母細胞復合體在體外成熟培養22-24h。
7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在牛卵母細胞的體外受精中，采用種公牛凍精，將洗滌好的精液與體外成熟后的卵丘-卵母細胞復合體放入受精液中，受精后去除顆粒細胞，置于IVC-1液中培養48h，然后轉移至IVC-2液中，體外發育7-9d，統計囊胚率；
其中，所述IVC-1液的配方為：
所述IVC-2液的配方同權利要求3所述。
8.根據權利要求1-7任一項所述的方法，其特征在于，體外培養條件為：38.5℃、5％C02、飽和濕度培養箱。
9.一種用于提高牛體外胚胎制備效率的體外發育培養液，其特征在于，所述培養液中含有0.01-70μM的C35H49F2N7O4·CF3CO2H。
10.根據權利要求9所述的培養液，其特征在于，所述培養液中含有30μM、50μM或70μM的C35H49F2N7O4·CF3CO2H，優選50μM。
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