[發(fā)明專利]一種雙抗體夾心化學(xué)發(fā)光免疫分析方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810316004.9
• 申請(qǐng)日: 2018-04-10
• 公開（公告）號(hào): CN108387747A
• 公開（公告）日: 2018-08-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙利軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 陜西師范大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68
• 代理公司: 北京科億知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 劉振

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，涉及一種雙抗體夾心化學(xué)發(fā)光免疫分析方法，采用抗RPTN N?端鼠單抗作為捕獲抗體包被于酶標(biāo)板，洗滌后加入待測血清或者RPTN標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)洗滌后加入抗RPTN C?端的兔多抗作為檢測抗體；洗滌后加入羊抗兔IgG?HRP，洗滌后加入魯米諾反應(yīng)液；洗滌后在化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上測定化學(xué)發(fā)光(RLU),RLU的強(qiáng)度代表RPTN的含量。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)了RPTN在精神分裂癥患者血清減少的現(xiàn)象，進(jìn)一步研制RPTN化學(xué)發(fā)光免疫方法并檢測確定血清RPTN的正常范圍，將為精神分裂癥的診斷及療效評(píng)估提供新的方法；為其他神經(jīng)精神類疾病的研究及抗精神類藥物的研發(fā)提供新的工具。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，特別涉及一種雙抗體夾心化學(xué)發(fā)光免疫分析方法。

背景技術(shù)

目前，對(duì)精神分裂癥的診斷及藥物療效評(píng)估多采用陽性和陰性癥狀量表(PANSS)等方法，而血清學(xué)指標(biāo)的研究仍然沒有理想的標(biāo)志物)。RPTN是哺乳動(dòng)物高度保守的S100鈣結(jié)合蛋白家族成員，此前被認(rèn)為是皮膚細(xì)胞特有的參與形成皮膚屏障的蛋白。我們報(bào)道了精神分裂癥患者和慢性甲基安非他明(冰毒)吸食者血清的RPTN水平顯著低于正常人(圖1，a)，而慢性冰毒吸食者被認(rèn)為是人類精神分裂癥的模型；同時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)非典型抗精神分裂藥物奧氮平(Olanzapine)能夠顯著增加血清RPTN的水平(圖1，b)。因此，血清RPTN水平不但是精神分裂癥的標(biāo)志物，也可評(píng)估藥物治療后的癥狀緩解。

目前用于科研分析血清RPTN的酶聯(lián)免疫分析試劑盒是華美公司生產(chǎn)的(CSB-EL020501HU),我們采用該試劑盒檢測的正常人血清RPTN平均水平為915.0pg/ml，部分正常人和大部分精神分裂癥患者血清RPTN的水平低于該方法的最小檢出量156pg/ml(圖1，a)。現(xiàn)有的該RPTN酶聯(lián)分析方法僅用于科學(xué)研究，而且靈敏度太低，也缺乏臨床檢驗(yàn)試劑所需的質(zhì)量控制指標(biāo)，無法提供正常人和精神分裂癥患者的血清RPTN的含量范圍。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種雙抗體夾心化學(xué)發(fā)光免疫分析方法，建立了一種靈敏度更高的血清RPTN化學(xué)發(fā)光免疫分析方法，由于化學(xué)發(fā)光免疫分析方法比傳統(tǒng)的酶聯(lián)分析法具有更高的靈敏度，本發(fā)明研制了一種人血清RPTN化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒，能夠分析正常人及精神分裂癥患者血清RPTN的水平范圍，確定診斷及評(píng)估精神分裂癥嚴(yán)重程度的RPTN檢測值。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種雙抗體夾心化學(xué)發(fā)光免疫分析方法，采用抗RPTN N-端鼠單抗作為捕獲抗體包被于酶標(biāo)板，洗滌后加入待測血清或者RPTN標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)洗滌后加入抗RPTN C-端的兔多抗作為檢測抗體；洗滌后加入羊抗兔IgG-HRP(辣根過氧化物酶)(abcam產(chǎn)品)，洗滌后加入魯米諾反應(yīng)液；洗滌后在化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上測定化學(xué)發(fā)光(RLU),RLU的強(qiáng)度代表RPTN的含量。

具體步驟如下：

分析人RPTN蛋白序列的抗原決定簇，設(shè)計(jì)N-端抗原決定簇序列，設(shè)計(jì)C-端抗原決定簇序列；將N-端抗原決定簇序列與KLH蛋白交聯(lián)后，免疫Balb小鼠，制備脾細(xì)胞，并與骨髓瘤細(xì)胞融合，然后制備N-端單抗，包被于酶標(biāo)板，作為捕獲抗體；將C-端抗原決定簇序列與KLH蛋白交聯(lián)后，免疫新西蘭大兔，制備抗C-端兔多抗，將抗C-端兔多抗作為檢測抗體；抗RPTN N-端鼠單抗作為捕獲抗體包被于酶標(biāo)板，洗滌后加入待測血清或者RPTN標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)洗滌后加入抗RPTN C-端的兔多抗作為檢測抗體；洗滌后加入羊抗兔IgG-HRP(辣根過氧化物酶)(abcam產(chǎn)品)，洗滌后加入魯米諾反應(yīng)液；洗滌后在化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上測定化學(xué)發(fā)光(RLU),RLU的強(qiáng)度代表RPTN的含量。

本發(fā)明的有益效果：首次發(fā)現(xiàn)了RPTN在精神分裂癥患者血清減少的現(xiàn)象，進(jìn)一步研制RPTN化學(xué)發(fā)光免疫方法并檢測確定血清RPTN的正常范圍，將為精神分裂癥的診斷及療效評(píng)估提供新的方法；為其他神經(jīng)精神類疾病的研究及抗精神類藥物的研發(fā)提供新的工具。

附圖說明