[發(fā)明專利]基于愈傷組織誘導(dǎo)建立馬藺高頻再生體系方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810314243.0
• 申請(qǐng)日: 2018-04-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108496800B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-07-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張興;曲彥婷;王書可;唐煥偉;陳菲;李黎;韓輝;熊燕;石朔宇;韓廷蔚;陳穎;張洪運(yùn);李虹;楊軼華;孫波;曲線
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 黑龍江省科學(xué)院自然與生態(tài)研究所;蘇州科技大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 北京慕達(dá)星云知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 崔自京

本發(fā)明涉及一種基于愈傷組織誘導(dǎo)建立馬藺高頻再生體系方法，該方法以春季白花馬藺葉片為外植體，以MS為基本培養(yǎng)基，利用激動(dòng)素(KT)、2,4二氯苯氧乙酸(2,4?D)、萘乙酸(NAA)、6?芐基腺嘌呤(6?BA)、吲哆丁酸(IBA)激素調(diào)節(jié)，建立一種基于愈傷組織誘導(dǎo)建立馬藺高頻再生體系的方法。該發(fā)明一個(gè)增殖繼代周期為4?5周，愈傷組織誘導(dǎo)率80％以上，愈傷組織不定芽誘導(dǎo)系數(shù)為8?10倍，繁殖不受季節(jié)的影響，可極大提高種苗繁殖系數(shù)，保持原有優(yōu)良性狀，為該品種栽培、應(yīng)用、生產(chǎn)提供科學(xué)、有效的繁殖方法，亦可為鳶尾屬植物的工廠化生產(chǎn)繁殖提供參考。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種基于愈傷組織誘導(dǎo)建立馬藺高頻再生體系方法。

背景技術(shù)

本發(fā)明涉及的白花馬藺(Iris.lactea Pall.)為鳶尾科鳶尾屬多年生草本花卉，葉基生，灰綠色，條形或狹劍形；花乳白色，直徑5-6厘米，花梗長(zhǎng)4-7厘米；花期長(zhǎng)5-6月；耐鹽堿、耐踐踏，根狀莖粗壯，根系發(fā)達(dá)，可用于水土保持、改良鹽堿土及脆弱生態(tài)環(huán)境；根、莖、花、種子均可入藥，馬藺也是具有較高觀賞價(jià)值的園林綠化景觀材料。

但由于東北地區(qū)冬季寒冷漫長(zhǎng)，夏季生長(zhǎng)季短，城市綠化可利用的植物種類少，且綠化成本較高，尤其是黑龍江省，能夠露地越冬的品種有限，因此大量繁育能夠在我省露地越冬的優(yōu)良品種，對(duì)豐富高寒地區(qū)園林綠化植物種類具有重要意義，由于馬藺分株繁殖速度較慢，增殖系數(shù)低，每年只能春季進(jìn)行繁殖，需要的母本數(shù)量較多，不適合大批量生產(chǎn)栽培。由于此品種繁殖率低，分株繁殖速度較慢，增殖系數(shù)極低，每年僅能增殖2-4倍，因此影響了此品種的大批量生產(chǎn)及廣泛應(yīng)用，在園林彩化、綠化大面積應(yīng)用過(guò)程中產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)受到限制，此發(fā)明方法為解決白花馬藺組培繁殖過(guò)程中從愈傷組織誘導(dǎo)不定芽從而提高不定芽擴(kuò)繁系數(shù)提出了具體方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明以優(yōu)化再生體系為目的，以保持遺傳穩(wěn)定性為核心，提供一種基于愈傷組織誘導(dǎo)建立馬藺高頻再生體系方法，以解決分株繁殖速度慢，增殖系數(shù)低，組培苗褐化、玻璃化等不能滿足工廠化育苗需求的問(wèn)題。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：一種基于愈傷組織誘導(dǎo)建立馬藺高頻再生體系方法，包括以下步驟：

1)外植體篩選：春季選擇馬藺健康植株展開(kāi)的葉片，選取葉片中間位置，剪下作為外植體；

2)外植體消毒：將葉片置于裝有清水的200mL燒杯中，加入2-3滴洗潔精，燒杯口套上紗網(wǎng)后，采用自來(lái)水洗凈后，加適量洗潔精在自來(lái)水處保持沖洗狀態(tài)30-40分鐘，用濾紙吸干水分；在燒杯中加入質(zhì)量百分比濃度10％次氯酸鈉溶液，使外植體材料完全浸泡其中，加入2滴吐溫20(Tween20)制成消毒液，輕輕搖晃，15-20分鐘后倒掉燒杯中所有消毒液，向燒杯中倒入經(jīng)過(guò)高溫高壓滅菌的無(wú)菌水沖洗外植體材料4次，無(wú)菌水使用遵循先少后多原則，清洗至燒杯表面沒(méi)有泡沫后，倒掉燒杯中無(wú)菌水，連帶燒杯放置于超凈工作臺(tái)上；

3)接種：將消毒好的葉片材料用已消毒濾紙吸干，葉片切成小正方形，尺寸為：0.5cm×0.5cm，將切成小方形的葉片平行置于基本培養(yǎng)基MS上，培養(yǎng)時(shí)間15天，培養(yǎng)室內(nèi)溫度為24-26℃，一個(gè)晝夜中培養(yǎng)室內(nèi)光照時(shí)間為12小時(shí)，培養(yǎng)室內(nèi)黑暗時(shí)間12小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000-2200Lux，Lux為：照度的國(guó)際單位；

4)愈傷組織不定芽誘導(dǎo)：篩選步驟3)中MS培養(yǎng)基中葉片無(wú)污染、葉片邊緣膨大的部分，轉(zhuǎn)接于第一培養(yǎng)基上，所述第一培養(yǎng)基構(gòu)成為：基本培養(yǎng)基MS附加0.02mg/L萘乙酸(NAA)、2.0mg/L 6-芐基腺嘌呤(6-BA)和1.0mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)；蔗糖30g/L；瓊脂粉5g/L；pH6.0；培養(yǎng)30天，葉片誘導(dǎo)出綠色、致密的愈傷組織，培養(yǎng)45-50天時(shí)，葉片誘導(dǎo)的愈傷組織的芽點(diǎn)處長(zhǎng)出許多不定芽，培養(yǎng)室內(nèi)溫度為24-26℃，一個(gè)晝夜中培養(yǎng)室內(nèi)光照時(shí)間為12小時(shí)，培養(yǎng)室內(nèi)黑暗時(shí)間12小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000-2200Lux，Lux為：照度的國(guó)際單位；