[發(fā)明專利]一種用于滑菇溯源的多糖電泳方法

有效

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• 申請日: 2018-04-10
• 公開（公告）號: CN108519423B
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李海平
• 申請（專利權(quán)）人: 天津商業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447
• 代理公司: 天津市三利專利商標(biāo)代理有限公司 12107
• 代理人: 徐金生

1.一種用于滑菇溯源的多糖電泳方法，其特征在于，包括以下步驟：

第一步：分別對需要檢驗(yàn)產(chǎn)地來源的第一滑菇以及已知產(chǎn)地來源的第二滑菇進(jìn)行多糖提取操作，獲得對應(yīng)的第一滑菇多糖粉末和第二滑菇多糖粉末；

第二步：將第一滑菇多糖粉末和第二滑菇多糖粉末分別與蒸餾水，按照預(yù)設(shè)的料液比進(jìn)行復(fù)溶，獲得第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液；

第三步：在相同的瓊脂糖凝膠電泳或者醋酸纖維薄膜電泳條件下，對第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液進(jìn)行電泳處理，獲知第一滑菇多糖和第二滑菇多糖在電泳介質(zhì)上的遷移距離，然后對比第一滑菇多糖和第二滑菇多糖在電泳介質(zhì)上的遷移距離，如果相等，判斷第一滑菇和第二滑菇的產(chǎn)地來源相同，否則，判斷第一滑菇和第二滑菇的產(chǎn)地來源不相同；

所述第三步具體包括以下步驟：

首先，在相同的電泳條件下，對第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液分別進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，或者對第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液分別進(jìn)行醋酸纖維薄膜電泳，獲得第一滑菇多糖和第二滑菇多糖對應(yīng)的電泳圖譜；

然后，通過比較第一滑菇多糖和第二滑菇多糖的電泳圖譜上顯示的在電泳介質(zhì)上的遷移距離，如果相等，判斷第一滑菇和第二滑菇的產(chǎn)地來源相同，否則，判斷第一滑菇和第二滑菇的產(chǎn)地來源不相同；

在第三步中，在相同的電泳條件下，對第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液分別進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，獲得第一滑菇多糖和第二滑菇多糖對應(yīng)的電泳圖譜，具體包括以下子步驟：

第一子步驟：將第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液分別加入到對應(yīng)的一份瓊脂糖凝膠中；

第二子步驟：通過電泳儀，分別對放置在瓊脂糖凝膠中的第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液進(jìn)行電泳處理；

第三子步驟：對加入有第一滑菇多糖溶液的瓊脂糖凝膠以及加入有第二滑菇多糖溶液的瓊脂糖凝膠，分別依次進(jìn)行染色、脫色處理，然后分別采集獲得第一滑菇多糖和第二滑菇多糖對應(yīng)的電泳圖譜，所述第一滑菇多糖和第二滑菇多糖對應(yīng)的電泳圖譜上分別顯示第一滑菇多糖和第二滑菇多糖在電泳介質(zhì)上的遷移距離；

在所述第二子步驟中，所述瓊脂糖凝膠被放入預(yù)設(shè)的第一電泳緩沖液中，所述預(yù)設(shè)的第一電泳緩沖液為0.2mol/L的硼砂-氫氧化鈉緩沖液或0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液；

在所述第三子步驟中，通過甲苯胺藍(lán)溶液或考馬斯亮藍(lán)溶液來進(jìn)行染色處理；

在所述第三子步驟中，通過預(yù)設(shè)脫色液來進(jìn)行脫色處理，所述預(yù)設(shè)脫色液具體包含無水乙醇、冰乙酸和水，其中，無水乙醇、冰乙酸和水之間的體積比為9∶1∶10；

在第三步中，在相同的電泳條件下，對第一滑菇多糖和第二滑菇多糖分別進(jìn)行醋酸纖維薄膜電泳，獲得第一滑菇多糖和第二滑菇多糖對應(yīng)的電泳圖譜，具體包括以下子步驟：

第一子步驟：將第一滑菇多糖溶液和第二滑菇多糖溶液分別涂覆在預(yù)設(shè)規(guī)格的一個(gè)醋酸纖維薄膜上；

所述醋酸纖維薄膜為經(jīng)過預(yù)處理操作的醋酸纖維薄膜，所述預(yù)處理操作具體為：將醋酸纖維薄膜使用過預(yù)設(shè)第三緩沖液完全浸透，并用清潔的濾紙吸去表面多余的預(yù)設(shè)第三緩沖液；

所述預(yù)設(shè)第三緩沖液是濃度為0.05mol/L硼砂緩沖液；

第二子步驟：通過電泳儀，分別對涂覆有第一滑菇多糖溶液的醋酸纖維薄膜以及涂覆有第二滑菇多糖溶液的醋酸纖維薄膜進(jìn)行電泳處理；

第三子步驟：對涂覆有第一滑菇多糖溶液的醋酸纖維薄膜以及涂覆有第二滑菇多糖溶液的醋酸纖維薄膜，分別依次進(jìn)行染色、漂洗處理，然后分別采集獲得第一滑菇多糖和第二滑菇多糖對應(yīng)的電泳圖譜；

在所述第三子步驟中，通過甲苯胺藍(lán)溶液來進(jìn)行染色處理；

在所述第三子步驟中，通過預(yù)設(shè)漂洗液來進(jìn)行漂洗處理，所述預(yù)設(shè)漂洗液具體包含無水乙醇、冰醋酸和水，其中，無水乙醇、冰醋酸和水之間的體積比為9∶1∶10。