[發明專利]一種溶藻弧菌噬菌體制劑、制備方法及其應用

在審

• 申請號: 201810313360.5
• 申請日: 2018-04-09
• 公開（公告）號: CN108651522A
• 公開（公告）日: 2018-10-16
• 發明（設計）人: 羅鵬;盧澤禹;田雨順;云龍;朱婉君
• 申請（專利權）人: 廣州諾晶生物技術有限公司
• 主分類號: A01N63/00
• 分類號: A01N63/00;A01N1/00;A61K35/76;A61P31/04;A61P31/02
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 宋靜娜;郝傳鑫

本發明公開了一種溶藻弧菌噬菌體制劑、制備方法及其應用。本發明利用溶藻弧菌噬菌體Vp670和海藻糖等輔劑，開發相應的噬菌體制劑，該噬菌體制劑施用后，會長期持續存在于水體環境中，保持致病的宿主菌與噬菌體數量的平衡，因此，與抗生素相比效果持久、使用量小。本發明的噬菌體Vp670制劑沒有毒副作用，是一種新型綠色的生物消毒制劑，可用于海水養殖動物溶藻弧菌感染防控，促進水產養殖業的健康發展。

技術領域

本發明涉及水產養殖技術領域，具體涉及一種溶藻弧菌噬菌體制劑、制備方法及其應用。

背景技術

細菌性疾病一直困擾著水產養殖業的發展，其中由致病溶藻弧菌爆發引起的流行性疾病對水產養殖業造成巨大經濟損失。治療溶藻弧菌和其他致病菌的常用方法是使用各種抗生素，但在水產養殖中使用抗生素不僅引起食品安全問題，也會引起一系列環境生態問題，包括海洋環境中大量耐藥菌的出現以及耐藥基因的傳播。據統計從海水中分離的大約90％的細菌具有至少一種抗生素抗性，而且大約20％的細菌對于至少5種抗生素具有抗性。因此，急需研制新型抗菌制劑來解決上述問題。

噬菌體是一類以細菌為宿主的病毒，又稱細菌病毒，廣泛存在于自然界中，它分為烈性噬菌體以及溫和噬菌體。烈性噬菌體可在敏感宿主菌內增殖，并使之裂解，也稱毒性噬菌體。溫和噬菌體基因組整合于宿主菌基因組中，成為細菌DNA的一部分，和宿主核酸同步復制，宿主細胞不裂解而繼續生長。其中，由于烈性噬菌體具有天然的裂菌特性且具有專一性，被認為是一種安全、非常有潛力的生物殺菌劑，近幾年由于超級耐藥菌的出現以及抗生素的副作用報道增多，噬菌體的研究再次受到重視。

噬菌體的專一性和其快速增殖的特點促使其成為治療細菌性疾病的有力工具。首先，噬菌體的治療具有特異性，可以針對某一特定有害細菌菌株有選擇性的殺滅，從而使生物體內或其生活環境的正常菌群平衡受到最小程度的影響，相比抗生素，其對環境毒副作用小，也保證了食品安全；其次，噬菌體可以隨宿主菌的增殖而增殖，并在細菌感染的整個過程中發揮作用，而不像抗生素那樣隨時間的推移療效逐漸降低；第三，噬菌體制劑獲取方便，價格低廉。目前噬菌體制劑已經受到許多生物技術公司的重視，國外已經有噬菌體藥物出現，但噬菌體制劑在水產養殖中的應用還在起步階段，市場中并未見有水產噬菌體制劑開發，因此噬菌體制劑的應用具有很大的發展潛力。

前期工作中，我們已經獲得到了噬菌體Vp670，又名ΦPE333，但并未進行感染能力研究和制劑開發，也未指出其應用途徑。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足之處而提供一種溶藻弧菌噬菌體制劑、制備方法及其應用，該噬菌體制劑具有專一裂解溶藻弧菌的特性，能夠特異高效殺滅養殖水體和養殖動物體內的溶藻弧菌，從而起到防治水產動物的作用，不破壞水環境中的其他菌群，不會對養殖動物以及消費者產生任何影響，且能夠長期存在水體環境中，保持致病宿主菌與噬菌體數量的平衡。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案如下：

一種溶藻弧菌噬菌體制劑，包括噬菌體Vp670和輔劑，所述輔劑包括海藻糖

上述技術方案中的制劑以噬菌體Vp670作為裂解溶藻弧菌的有效成分，具有專一裂解溶藻弧菌的特性，不破壞水環境中的其他菌群，不會對養殖動物以及消費者產生任何影響，且能夠長期存在水體環境中，保持致病宿主菌與噬菌體數量的平衡。

本發明還提供了一種上述溶藻弧菌噬菌體的制備方法，包括以下步驟：

(1)將溶藻弧菌菌液與噬菌體Vp670培養液混合，形成混合培養液，搖動培養4～6h；

(2)在步驟(1)中的混合培養液加入氯仿，氯仿與混合培養液的體積比為0.05％～0.1％，搖動培養10～15min后；

(3)過濾培養液；

(4)在步驟(3)的濾液中加入海藻糖，充分混勻，海藻糖與濾液的質量比為0.2％～0.4％，得到所述的噬菌體制劑。