[發明專利]中華鱘親緣關系鑒定試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201810312499.8
• 申請日: 2018-04-09
• 公開（公告）號: CN108588231B
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發明（設計）人: 胡亞成;杜合軍;楊菁;劉雪清;肖衎
• 申請（專利權）人: 中國長江三峽集團公司中華鱘研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 宜昌市三峽專利事務所 42103
• 代理人: 成鋼

本發明公開了中華鱘親緣關系鑒定試劑盒及其應用方法，屬于動物分子遺傳學領域。本試劑盒提供了5組中華鱘微衛星標記的雙重PCR反應體系。利用本試劑盒可以快速鑒定個體之間的親緣關系，避免中華鱘之間近親繁殖。本試劑盒的擴增結果具有高度的多態性和穩定性，并且本試劑盒所消耗的財力和人力都比傳統的PCR反應減少了一半，具有巨大的實用價值。

技術領域

本發明涉及一種中華鱘親緣關系鑒定試劑盒及其應用，屬于動物分子遺傳學領域。

背景技術

中華鱘是全世界20余種鱘科魚類中分布緯度最低，體型最大的魚，為我國特有的的物種。上世紀70年代，長江里的繁殖群體能達到1萬余尾，由于環境污染、過度捕撈、棲息地喪失等諸多因素中華鱘已瀕臨滅絕。對瀕危物種的保護不僅保護瀕危物種的個體而且對瀕危物種的基因也有進行了解和保護，進而制定良好的育種政策，防止近親繁殖。但是直至今日對中華鱘的遺傳性研究十分有限，急需從分子方向對中華鱘進行研究。

微衛星標記是目前研究瀕危動物保護遺傳學中最理想的一類方式，微衛星具有多態性高、共顯性遺傳、遍布整個基因組等優勢，廣泛應用于動物遺傳性研究。微衛星標記多重PCR是在同一PCR反應體系里加上二對以上引物，同時擴增出多個核酸片段的PCR反應。多重PCR具有高效性、系統性、經濟簡便性等優點。有關中華鱘的微衛星標記多重PCR國內外未見報道。本發明提供了一種利用中華鱘微衛星雙重PCR體系鑒定個體之間的親緣關系的試劑盒實現了對中華鱘個體之間的親緣關系的測量進而確定個體之間的親緣關系，為中華鱘的遺傳管理、人工繁殖配種制定、遺傳背景分析提供了堅實的技術支持。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用中華鱘微衛星雙重PCR體系鑒定個體之間的親緣關系的試劑盒以及利用本試劑盒實現對中華鱘的個體之間的親緣關系的鑒定方法，進而確定個體之間的親緣關系，避免中華鱘個體之間近親繁殖。

技術方案

利用中華鱘微衛星雙重PCR體系測量個體之間的親緣關系的試劑盒中的5組中華鱘微衛星標記的雙重PCR反應體系中的微衛星引物如下：

所述的中華鱘親緣關系鑒定試劑盒及其應用，所述的試劑盒還包括PCR試劑，所述的試劑為：10×PCR Buffer 2-3ul，2.5mmol/L dNTP 0.1-1ul，MgCl₂ 1-2ul，每組反應體系兩對引物的上下游引物各0.5-2ul，Taq酶0.1-0.5ul，DNA模板1-5ul，超純水10-15ul。

進一步優選為所述的試劑盒中包括PCR試劑，所述的試劑為：10×PCR Buffer2.5ul，2.5mmol/L dNTP 0.5ul，MgCl₂ 1.5ul，每組反應體系兩對引物的上下游引物各1ul，Taq酶0.3ul，DNA模板3ul，超純水13.2ul。

所述的利用中華鱘微衛星雙重PCR體系測量個體之間的親緣關系的試劑盒測量中華鱘個體之間的親緣關系的方法，包括以下步驟：取中華鱘組織樣品；提取中華鱘樣品DNA；利用權力要求1所示的5組中華鱘微衛星標記的雙重PCR反應體系中的微衛星引物對中華鱘樣品進行PCR擴增；把PCR擴增產物在10％的聚丙烯酰胺膠上進行電泳分離；根據分離結果統計PCR擴增產物的基因型；根據各個個體的基因分型結果用NTsys軟件畫出各個個體之間的聚類分析圖，確定個體之間的親緣關系。所述的PCR反應程序為：94℃預變性1-5min；94℃變性25-35s，退火溫度56℃復性25-35s，72℃延伸25-35s，25-35個循環；72℃延伸8-15min；4℃保存。所述的PCR反應程序為：94℃預變性3min；94℃變性30s，退火溫度56℃復性30s，72℃延伸30s，30個循環；72℃延伸10min；4℃保存。

與現有技術相比，本發明具有以下的優點：