[發明專利]中華鱘親緣關系鑒定試劑盒及其應用有效
| 申請號： | 201810312499.8 | 申請日： | 2018-04-09 |
| 公開（公告）號： | CN108588231B | 公開（公告）日： | 2021-08-03 |
| 發明（設計）人： | 胡亞成;杜合軍;楊菁;劉雪清;肖衎 | 申請（專利權）人： | 中國長江三峽集團公司中華鱘研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12N15/11 |
| 代理公司： | 宜昌市三峽專利事務所 42103 | 代理人： | 成鋼 |
| 地址： | 443100 *** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 中華鱘 親緣 關系 鑒定 試劑盒 及其 應用 | ||
1.中華鱘親緣關系鑒定試劑盒在鑒定中華鱘個體之間的親緣關系上的應用，包括以下步驟：取中華鱘組織樣品；提取中華鱘樣品DNA；利用試劑盒提供的5組中華鱘微衛星標記的雙重PCR反應體系中的微衛星引物對中華鱘樣品進行PCR擴增；把PCR擴增產物在聚丙烯酰胺膠上進行電泳分離；根據分離結果統計PCR擴增產物的基因型；根據各個個體的基因分型結果用NTsys軟件畫出各個個體之間的聚類分析圖，確定個體之間的親緣關系，所述試劑盒包括10對微衛星引物如下：
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的試劑盒中包括PCR試劑，所述的試劑為：10×PCR Buffer 2-3ul，2.5mmol/L dNTP 0.1-1ul，MgCl2 1-2ul，每組反應體系兩對引物的上下游引物各0.5-2ul，Taq酶0.1-0.5ul，DNA模板1-5ul，超純水10-15ul。
3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的試劑盒中包括PCR試劑，所述的試劑為：10×PCR Buffer 2.5ul，2.5mmol/L dNTP 0.5ul，MgCl2 1.5ul，每組反應體系兩對引物的上下游引物各1ul，Taq酶0.3ul，DNA模板3ul，超純水13.2ul。
4.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的PCR反應程序為：94℃預變性1-5min；94℃變性25-35s，退火溫度56℃復性25-35s，72℃延伸25-35s，25-35個循環；72℃延伸8-15min；4℃保存。
5.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的PCR反應程序為：94℃預變性3min；94℃變性30s，退火溫度56℃復性30s，72℃延伸30s，30個循環；72℃延伸10min；4℃保存。
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