[發明專利]一種快速檢測沙門氏菌污染的方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201810309808.6
• 申請日: 2018-04-09
• 公開（公告）號: CN108531552A
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發明（設計）人: 陳瑞;張志剛;張磊
• 申請（專利權）人: 江西牧威利元生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6816
• 分類號: C12Q1/6816;C12Q1/689
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一種快速檢測沙門氏菌的檢測方法，包括如下步驟：步驟一，制備探針分子：根據沙門氏菌的基因組結構和保守序列，選取沙門氏菌的invA和invE基因作為檢測目標片段，分別設計探針分子，所述invA基因檢測的探針分子序列為5’?GCGAGTGGTAAATTATTCCGATGAAGT?3’，所述invE基因檢測的探針分子的序列為5’?GTGATTTAGTCCTTGTGTTACGCGA?3’，上述基因檢測的探針分子的5’端分別采用不同的報告熒光基團進行標記；步驟二，將聚苯乙烯納米球溶液與步驟一所制得的探針分子混合，然后加入待測樣品，檢測熒光。

技術領域：

本發明屬于生物技術領域，涉及食源性疾病的致病菌—沙門氏菌的檢測，具體涉及一種快速檢測食品中沙門氏菌污染的方法及試劑盒。

背景技術：

沙門氏菌(Salmonella)是一百多年前發現的一種病原體，其是一群形態和培養特性都類似的腸桿菌科的一個大屬，其菌型繁多，分布廣泛，是常見的重要的人畜共患病病原菌之一，也是引起人發生食物中毒最常見的病原菌，它不僅可以引起胃腸炎,還會引起傷寒、敗血癥及腸外灶性感染等多種癥候群。據統計，在世界各國的細菌性食物中毒中，沙門氏菌引起的食物中毒常列榜首，在我國，以沙門氏菌引起的食物中毒也排在細菌性食物中毒的首位，沙門氏菌是監測食品衛生狀況的重要指標菌，一旦發現食品污染沙門氏菌，表明監測的食品衛生不合格。食品及其原料中沙門氏菌的快速、現場檢測對食品安全控制具有重要意義.。

目前，世界各國對食源性沙門氏菌的檢測方法及限量標準均制定出了非常嚴格的規定，使受污染的食品能夠得到及時處理，以保障食品質量及食品安全。然而，包括我國在內的許多國家對沙門氏菌的臨床檢測仍然采用傳統的培養方法，這種常規的沙門氏菌檢測存在操作繁瑣、檢測時間長、結果判定誤差大等諸多弊端，已經遠遠不能滿足現代快速檢測診斷的需要。近年來，沙門氏菌檢測技術有了很大的進展，由十分困難的傳統分離培養法到免疫學檢測方法發展成為今天的分子生物學檢測技術，例如黃金海等人研究的環介導等溫擴增技術(LAMP)對沙門氏菌進行檢測（“食品中沙門氏菌LAMP快速檢測方法的建立”，《天津大學學報》，2012年05期），鐘偉軍等人研究了食品中沙門氏菌PCR快速檢測方法的建立（“食品中沙門氏菌PCR快速檢測方法的建立”，《中國人獸共患病學報》，2007年第12期），然而以上分子檢測方法均需要昂貴的設備，并且在結果判定方面不直觀，需要借助一定的設備才能判斷。

inv 基因簇是沙門氏菌屬的特異性引物基因, 具有屬特異性，細菌感染宿主通常是先粘附到宿主組織上 , 進而通過細菌的毒力因子侵襲宿主細胞 , 導致宿主患病及死亡, 這些毒力因子由細菌的基因編碼, 是細菌的基因產物。菌體的 inv蛋白決定其侵襲力, 與沙門氏茵的毒力有關。沙門氏菌的侵襲蛋白(invasion protein, inv)決定細菌進入宿主上皮細胞的能力, 與沙門氏菌的致病性密切相關, inv基因由invA、 invB、 invC、invD和invE 等基因組成，其中 invA 為沙門氏菌的主要毒力因子，invE蛋白是沙門氏菌致病島(SPI-1)編碼的 III 型分泌系統中的一個必需組成成份 , 它介導細菌的一組具有調節細胞功能活性的效應蛋白(即細菌的轉位酶SipB、SipC和SipD) 進入宿主細胞 , 從而完成細菌在感染細胞內 的定植 , 因此是沙門氏菌侵入細胞必需的介導因子之一 。

發明內容：

基于現有沙門氏菌分子檢測方法的不足，本發明旨在提供一種快速檢測沙門氏菌污染的方法及其運用，該沙門氏菌的檢測方法操作簡單，靈敏度高，特異性高，特別適合基層食品安全的檢測。

為實現本發明的目的，解決現有技術中存在的技術問題，本發明采用了如下技術方案：

一種沙門氏菌的檢測方法，包括如下步驟：