[發明專利]一種快速檢測沙門氏菌污染的方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201810309808.6
• 申請日: 2018-04-09
• 公開（公告）號: CN108531552A
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發明（設計）人: 陳瑞;張志剛;張磊
• 申請（專利權）人: 江西牧威利元生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6816
• 分類號: C12Q1/6816;C12Q1/689
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種快速檢測沙門氏菌的檢測方法，包括如下步驟：

步驟一，制備探針分子：根據沙門氏菌的基因組結構和保守序列，選取沙門氏菌的invA和invE基因作為檢測目標片段，根據GenBank公開的沙門氏菌invA和invE基因序列，分別設計探針分子，所述invA基因檢測的探針分子序列為5’-GCGAGTGGTAAATTATTCCGATGAAGT-3’，所述invE基因檢測的探針分子的序列為5’- GTGATTTAGTCCTTGTGTTACGCGA-3’，上述基因檢測的探針分子的5’端分別采用不同的報告熒光基團進行標記，即invA基因檢測的探針分子結構為：報告熒光基團1- GCGAGTGGTAAATTATTCCGATGAAGT；invE基因檢測的探針分子結構為：報告熒光基團2- GTGATTTAGTCCTTGTGTTACGCGA；

步驟二，將聚苯乙烯納米球溶液與步驟一所制得的探針分子：報告熒光基團1-GCGAGTGGTAAATTATTCCGATGAAGT以及報告熒光基團2- GTGATTTAGTCCTTGTGTTACGCGA混合，然后加入待測樣品，檢測熒光。

2.根據權利要求1所述的快速檢測沙門氏菌的檢測方法，其特征在于，步驟一中所述的報告熒光基團1和報告熒光基團2分別選自異硫氰酸熒光素(FITC)、羥基熒光素(FAM)、四氯熒光素(TET)、四甲基羅丹明（TAMRA）、ROX、CY3、CY5、CY5.5、CAL red、Red640和Texas Red等，且報告熒光基團1和2不同。

3.根據權利要求1或2所述的快速檢測沙門氏菌的檢測方法，其特征在于，步驟二中所述的聚苯乙烯納米球由以下方法制備得到：將0.05g過硫酸氨和0.05g十二烷基磺酸鈉溶解到10mL水中，再加入12mL苯乙烯，將反應物加熱一段時間，然后將產物離心，用甲醇沖洗移除SDS，即制得聚苯乙烯納米球。

4.一種用于沙門氏菌檢測的試劑盒，其包括：invA基因檢測的探針分子溶液、invE基因檢測的探針分子溶液、聚苯乙烯納米球溶液、陽性對照、陰性對照，其中invA基因檢測的探針分子結構為：報告熒光基團1- GCGAGTGGTAAATTATTCCGATGAAGT；invE基因檢測的探針分子結構為：報告熒光基團2- GTGATTTAGTCCTTGTGTTACGCGA。

5.根據權利要求4所述的用于沙門氏菌檢測的試劑盒，其特征在于，所述的報告熒光基團1和報告熒光基團2分別選自異硫氰酸熒光素(FITC)、羥基熒光素(FAM)、四氯熒光素(TET)、四甲基羅丹明（TAMRA）、ROX、CY3、CY5、CY5.5、CAL red、Red640和Texas Red等，且報告熒光基團1和2不同。

6.根據權利要求4所述的用于沙門氏菌檢測的試劑盒，其特征在于，所述陰性對照為去離子水，所述陽性對照為沙門氏菌的核酸提取物，例如購自CGMCC的編號為CGMCC 1.1190的腸沙門氏菌腸亞種；或者購自ATCC的編號為ATCC14028的鼠傷寒沙門氏菌；也可以是實驗室分離、鑒定的沙門氏菌菌株，采用商業化的核酸提取試劑盒對沙門氏菌進行提取獲得的沙門氏菌核酸提取物。