[發明專利]誘導分化睪丸間質細胞的方法及其在性功能恢復中的應用

在審

• 申請號: 201810309042.1
• 申請日: 2018-04-09
• 公開（公告）號: CN108588004A
• 公開（公告）日: 2018-09-28
• 發明（設計）人: 宋蕓娟;胡士庶;張治國
• 申請（專利權）人: 深圳市萊利賽生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;A61K35/52;A61P5/26
• 代理公司: 北京棧橋知識產權代理事務所(普通合伙) 11670
• 代理人: 潘衛鋒

本發明公開了一種誘導分化睪丸間質細胞的方法及其在性功能恢復中的應用，屬于生物醫藥技術領域，利用充間質干細胞誘導分化睪丸間質細胞，并利用睪丸間質細胞與一定比例的其他成分組成性功能恢復藥物，將該性功能恢復藥物制成注射液，以注射的方式注射到病灶區域，通過睪丸間質細胞分泌睪酮素來恢復體內的睪酮水平，有效恢復男性性功能。總之，本發明安全有效，實用性強，高效的誘導分化出睪丸間質細胞，并且本發明藥物可以有效地恢復男性性功能等優點。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，具體是涉及一種誘導分化睪丸間質細胞的方法及其在性功能恢復中的應用。

背景技術

間充質干細胞(mesenchymal stem cells,MSC)，是一種具有自我復制能力和多向分化潛能的成體干細胞，這種干細胞能夠發育成硬骨、軟骨、脂肪和其他類型的細胞。間充質干細胞可以接受移植，而它們會成長為何種類型的細胞取決于其被注入的部位。例如，被注入心臟的間充質干細胞能夠形成健康的新組織等。1976年，Freidenstein首次發現在骨髓里存在一群不純一的細胞群體，這種細胞在體外培養時貼壁生長，形態和成纖維細胞相似，呈克隆性增殖，并提出“骨髓間充質干細胞(mesenchymalstemcells,MSC)的概念。后經過深入和廣泛的研究，發現存在于人體發生、發育過程的許多種組織中。人類對間充質干細胞的生物學特性、來源、誘導分化、前期臨床應用等取得了長足的進展。例如，骨髓間充質干細胞通過誘導能產生具有合成性腺激素和腎上腺類型類固醇激素能力的細胞，但骨髓間充質干細胞體外增殖能力、多向分化能力以及細胞穩定性都會隨著骨髓供體的年齡增長或疾病的影響逐漸不同程度的減弱甚至喪失；并且，骨髓間充質干細胞的分化效率較低，分泌的性腺激素量較低，需要尋找其他來源的干細胞和有效的誘導分化方法，可以更高效地將干細胞誘導分化為睪丸間質細胞。

隨著人均壽命的延長，人口老齡化問題越來越嚴重，中老年男性雄激素部分缺乏癥患者越來越多。目前臨床上主要采用了外源性雄激素替代療法，目的是維持血清中睪酮的生理濃度，以替代內源性睪酮的生理功能。然而長期服用雄激素副作用較大，其一，體內雄激素的靶細胞較多，長期服用外源雄激素治療容易會有毒副作用的發生，尤其是前列腺；其二，不同個體間血清睪酮水平差異較大，病人需頻繁抽血檢查相關指標以調整用量；其三，睪酮替代治療會破壞人體雄激素分泌晨高夜低的自然節律，還會抑制自身睪丸的雄激素分泌和生精功能。因此，現需要一種方法來優化誘導分化睪丸間質細胞和解決男性性功能恢復的問題。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明提供了一種誘導分化睪丸間質細胞的方法及其在性功能恢復中的應用，利用充間質干細胞誘導分化睪丸間質細胞，并采用睪丸間質細胞為主制備恢復男性性功能的藥物，治療效果良好。

本發明的技術方案是:一種誘導分化睪丸間質細胞的方法，包括以下步驟:

(1)間充質干細胞的培養:將間充質干細胞單體按4-6×10⁵/ml接種于干細胞培養液中，并置于38℃的培養箱內，以1℃/天的速度降至36℃，后一直恒溫保持在36℃，之后每2-3天換液傳代一次，收獲4-6代間充質干細胞，然后用體積比為2:1.5的0.3％膠原酶和0.25％胰蛋白酶先后加入進行消化25-40min，再通過振蕩器震蕩10-12min，得到培養擴增的間充質干細胞；其中干細胞培養液為DMEM和F12按體積比1.5:1混合后并加入3％FBS作為基礎培養液，還含有55ng/ml EGF、15ng/ml bFGF、3％非必需氨基酸、0.3mM GABA、1.5％復合維生素，余量為超純水，所述FBS所含的抗體、補體等對細胞有害的成分最少，避免有害成分過多影響細胞的擴增；所述EGF能夠促進細胞的增殖分化；所述bFGF具有很強的促細胞分裂增殖活性，能促進細胞擴增；所述GABA能促進細胞生長。