[發明專利]一種PEG修飾膽固醇氧化酶和膽固醇脂酶的制備方法

在審

• 申請號: 201810306747.8
• 申請日: 2018-04-08
• 公開（公告）號: CN108588044A
• 公開（公告）日: 2018-09-28
• 發明（設計）人: 羅維曉;魏海明;王美麗;胡曉飛
• 申請（專利權）人: 山東博科生物產業有限公司
• 主分類號: C12N9/04
• 分類號: C12N9/04;C12N9/18
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種PEG修飾膽固醇氧化酶和膽固醇脂酶的制備方法如下：

1）基本原理：以PEG20000為載體，在激活劑以及離子物質的存在的情況下，使膽固醇氧化酶和膽固醇脂酶與PEG20000之間形成離子鍵，以獲取具有對脂蛋白具有選擇性的PEG修飾酶；

2)基本步驟：

首先配置緩沖液，然后加入對氨基苯磺酸和AEO-9兩種物質作為激活劑，然后加入載體PEG20000（sigma），再加入保護劑以及乳化劑和離子物質攪拌均勻后，依次加入膽固醇氧化酶和膽固醇脂酶，慢中速攪拌10分鐘，然后使用低轉速離心機離心后，取出上清液即可得到同等效果的PEG修飾酶；

3)配方組成成分：

PIEPES 100mmol/L PH=7.0

對氨基苯磺酸 5mmol/L

AEO-9 1.2g/L

PEG20000（sigma） 5G/L

保護劑 2ml/L-3ml/L

乳化劑 1ml/L-3 ml /L

離子物質 3g/L-5g/L

膽固醇氧化酶 3KU/l

膽固醇脂酶 1KU/l

MIT 0.5g/L-1g/L。

2.根據權利要求1所述的一種PEG修飾膽固醇氧化酶和膽固醇脂酶的制備方法，其特征在于試劑中所選擇的酶結合載體為PEG20000。

3.根據權利要求1所述的一種PEG修飾膽固醇氧化酶和膽固醇脂酶的制備方法，其特征在于試劑R1所述PEG激活劑為對氨基苯磺酸和AEO-9。

4.根據權利要求1所述的一種PEG修飾膽固醇氧化酶和膽固醇脂酶的制備方法，其特征在于所述乳化劑為曲拉通-100。

5.根據權利要求1所述的一種PEG修飾膽固醇氧化酶和膽固醇脂酶的制備方法，其特征在于所述離子物質為氯化鈉。

6.根據權利要求1所述的一種PEG修飾膽固醇氧化酶和膽固醇脂酶的制備方法，其特征在于所述保護劑為磷脂血清。