[發明專利]一種玉米大斑病高效抗病鑒定接種體及其制備方法

在審

• 申請號: 201810304500.2
• 申請日: 2018-04-04
• 公開（公告）號: CN108456712A
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發明（設計）人: 蒙成;黃艷花
• 申請（專利權）人: 廣西農業職業技術學院
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 廣州市紅荔專利代理有限公司 44214
• 代理人: 李彥孚;何承鑫

本發明提供一種玉米大斑病高效抗病鑒定接種體及其制備方法，接種體由以下原料組成：小麥100g、甘露醇2.0～3.0g、玉米葉10～25g，制備步驟包括：1）玉米大斑病強致病力菌株的篩選；2）玉米大斑病強致病力菌株的保存；3）二級菌種的配制；4）接種體的配制；5）接種體的培養。本發明具有以下優點：獲得用于玉米大斑病抗病性鑒定的菌株為強致病力、高純度、高活力的菌株，為玉米抗病性鑒定的準確性和高效性提供保障；工作效率比平板培養基極大提高；避免小昆蟲及雜菌的感染，獲得高質量接種體成品；接種體的營養及其培養條件利于玉米大斑病菌分生孢子的產生，產孢速度快、產孢量大，產孢期長。

技術領域

本發明屬于植物病原真菌研究技術領域，具體涉及一種玉米大斑病高效抗病鑒定接種體及其制備方法。

背景技術

玉米大斑病（Northern Corn Leaf Blight)是玉米的一種重要葉部病害。1876年玉米大斑病在意大利首次發現，目前已成為世界性流傳病害之一，在我國各地也普遍發生，大斑病的流行，造成玉米植株早衰，雌穗禿尖，普遍給玉米生產造成較大損失，嚴重地塊產量下降30%～50%，甚至更多。目前防治該病害主要以種植抗病品種為主，科學合理品種布局，減少初侵染源，化學防治等綜合技術措施。利用抗病種質資源，選育和種植抗病品種是控制玉米大斑病流行的主要有效措施，在抗病品種的選育與利用過程中,抗病性鑒定已成為玉米育種及其區域適應性的一個常規工作，而獲得大量玉米大斑病菌分生孢子，或帶大量分生孢子的接種體是該工作順利進行的基礎條件。

實驗中通常采用高粱粒組織培養基來培養玉米大斑病分生孢子，方法為將培養基平板培養的病菌接種于經高壓滅菌的高粱上，培養5～7d菌絲長滿高粱粒后，用清水洗刷掉籽粒表面菌絲，轉放到方盤類器具內再進行室溫黑暗培養；待產孢后即可進行玉米抗病鑒定接種。該方法通常能制備的分生孢子量較少，在瓷盤中開放產孢，極易造成雜菌污染、滋長小昆蟲。石妞妞，杜宜新，陳福如等人發明“一種玉米大斑病菌產孢培養基及其應用”（申請號：CN201610567969.6），用該方法培養即產生大量形態一致、成熟度一致的分生孢子。但該方法還是利用平板培養基進行產孢，其產孢、取孢操作過程繁瑣，不利于大量分生孢子的獲取，不便于進行大面積抗病鑒定操作，不能用帶病菌培養基進行接種。

在抗病鑒定試驗中，通常采用隨機分離得到的玉米大斑病菌作為供試菌株，但有時采用的菌株致病力不強，對抗病鑒定效果不理想；在病菌分離過程中，常采用稀釋法進行單孢分離，不能確定是否得到單細胞純菌株。在病菌的保存中，常采用PDA培養基進行培養后保存，但因PDA培養基營養較高，病菌生長旺盛，保存后菌株的活力容易衰退。采用標記法進行單細胞分離，經致病力鑒定篩選菌株，用低營養培養基作為菌株保存基質，是保證菌株純度、致病力及活力的保障。

因此，尋找一種無污染、分生孢子量大、致病力強、成本低且制備過程操作簡單、可以用帶病菌組織進行接種的接種體及其培養方法，對開展大面積玉米大斑病抗病性接種鑒定具有重要意義。

發明內容

本發明的目的旨在提供一種快速、大量制備玉米大斑病高效抗病鑒定接種體及其方法。

為實現上述目的，本發明玉米大斑病高效抗病鑒定接種體，接種體由以下重量比的原料組成：小麥100g、甘露醇2.0～3.0g、玉米葉10～25g。

進一步地，所述的玉米大斑病高效抗病鑒定接種體的制備方法，步驟如下：

1）玉米大斑病強致病力菌株的篩選，先進行病菌的分離，然后用單細胞進行純化，采用柯赫氏法則進行病菌的驗證，最后通過常規菌株致病力的測定篩選出強致病力菌株；

2）玉米大斑病強致病力菌株的保存，把篩選到的強致病力菌株放入PCA斜面培養基中培養4～7d，放入4℃冰箱進行保存；

3）二級菌種的配制：活化后的菌株放入滅菌后的高粱粒培養基中在24～26℃培養6～7d，即得二級菌種；