[發明專利]治療子宮內膜損傷和卵巢早衰的子宮內膜干細胞及外泌體的聯合制劑、制備方法與給藥方法

在審

• 申請號: 201810304218.4
• 申請日: 2018-04-04
• 公開（公告）號: CN109893543A
• 公開（公告）日: 2019-06-18
• 發明（設計）人: 魯振宇;張冰晶;韓洪起;牟鑫煜;徐悅
• 申請（專利權）人: 天津欣普賽爾生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: A61K35/48
• 分類號: A61K35/48;A61P15/00;C12N5/071
• 代理公司: 天津才智專利商標代理有限公司 12108
• 代理人: 王曉紅

1.一種治療子宮內膜損傷和卵巢早衰的子宮內膜干細胞及外泌體的聯合制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)人子宮內膜干細胞的培養：選取生長狀態良好的，微生物檢測均為陰性的，P2-P8的人源子宮內膜干細胞，按照3-5*10⁴/cm²的初始密度接種于細胞培養瓶或細胞培養皿中，培養基為基礎培養基中含有體積比濃度5-15％的胎牛血清的培養體系；

(2)接種培養2-4天后，細胞融合率達到80-95％，細胞生長狀態良好，吸棄全部培養上清，并以醫用復方電解質注射液清洗細胞2-4次，然后加入適量復方電解質溶液，使溶液高度達到2-3mm，放入二氧化碳培養箱中饑餓培養；

(3)饑餓培養18-30h后，回收全部培養上清，以0.22um孔徑濾膜過濾，過濾后的培養上清在3000-5000g的離心力條件下離心10-20min，再次回收離心上清；

(4)在200000-500000g的離心力條件下對回收的上清離心30-60min，離心后輕輕取出離心管，以移液管吸棄上部70％-90％體積的液體，將下部10％-30％體積的液體及沉淀混合均勻后作為制備子宮內膜治療制劑的外泌體溶劑，在2-8℃條件下保存；

(5)人子宮內膜干細胞的培養：選取生長狀態良好的，微生物檢測均為陰性的，P2-P8的人源子宮內膜干細胞，按照3-5*10⁴/cm²的初始密度接種于細胞培養瓶或細胞培養皿中，培養基為基礎培養基中含有體積比濃度5-15％的胎牛血清的培養體系；

(6)接種培養2-4天后，細胞融合率達到80-95％，細胞生長狀態良好，回收全部細胞，并以復方電解質溶液清洗細胞3-4次，將最終獲得的細胞按照0.5-2*10⁶/ml的濃度重懸于已經復溫至18-24℃的步驟(4)得到的外泌體溶劑中，制備成聯合制劑。

2.如權利要求1所述制備方法得到的治療子宮內膜損傷和卵巢早衰的子宮內膜干細胞及外泌體的聯合制劑。

3.如權利要求2所述治療子宮內膜損傷和卵巢早衰的子宮內膜干細胞及外泌體的聯合制劑，通過直接注入子宮內部、靜脈輸注或局部多點注射的給藥方法。