[發明專利]一種采用DNA及PCR技術鑒定新鮮羊肉貯藏時間的方法

有效

• 申請號: 201810301927.7
• 申請日: 2018-04-04
• 公開（公告）號: CN108588187B
• 公開（公告）日: 2021-12-28
• 發明（設計）人: 劉永峰;趙晶
• 申請（專利權）人: 陜西師范大學
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851
• 代理公司: 西安永生專利代理有限責任公司 61201
• 代理人: 高雪霞

本發明公開了一種采用DNA及PCR技術鑒定新鮮羊肉貯藏時間的方法，不同貯藏條件(凍藏?20℃、冷藏4℃、中溫10℃和室溫20℃)下羊肉，通過分離提取其中羊DNA，測定羊DNA含量，確定該羊肉所處新鮮程度(一級鮮肉、二級鮮肉和變質肉)；再以此DNA為模板進行熒光定量PCR擴增，根據不同貯藏溫度、不同新鮮程度下羊肉貯藏時間與熒光定量PCR擴增的ct值差的數學方程，精確判斷羊肉貯藏放置的時間，為羊肉在不同溫度下放置時間的鑒別提供一種新方法。本發明操作簡單、精確度高、應用前景廣闊，對于羊肉的質量安全檢測具有重要的意義，有利于肉品加工企業和廣大消費者根據貯藏時間選擇羊肉原料。

技術領域

本發明屬于食品安全檢測技術領域，具體涉及一種采用DNA及PCR技術鑒定新鮮羊肉貯藏時間的方法。

背景技術

羊肉含有蛋白質、脂肪、礦物質等豐富的營養物質，其產品深受廣大消費者歡迎。2015年“僵尸肉”事件的發生，引起了社會廣泛關注，肉類品質安全及貯藏時間倍受重視。然而，畜禽肉類貯藏保質期尚無標準明確要求，尤其是，對于羊肉貯藏在沒有記錄的情況下，目前沒有發現對貯藏時間的研究報道。尤其是冷凍和冷藏羊肉貯藏時間的判定就比較重要了。

目前，冷凍貯藏是肉類最有效的方法之一，能抑制微生物的污染，延長保質期，但由于凍藏期間冰晶的形成、水分升華、蛋白質變性、脂肪氧化等，降低了肉的品質；冷藏貯藏期間羊肉的保質期相對較短且肉品質隨著貯藏時間延長而降低；家庭常見的室溫條件下貯藏，肉的保質期較短，受到微生物的污染和自身酶的作用容易導致肉腐敗變質。在不同溫度下貯藏，隨貯藏時間的延長肉品質均會受到不同程度的影響。

在檢測肉品質方面，理化指標(如水分含量、色差、pH等)檢測較為普遍。揮發性鹽基氮TVB-N作為反映肉品新鮮程度的一項重要指標，在貯藏過程中由于酶和細菌的作用，蛋白質分解而產生氨及胺類等堿性含氮物質，使肉品質下降。分子生物學技術日新月異，大規模現代化新設備、新技術和新方法等在食品科學研究領域中發揮著越來越重要的作用。許多過去不能解釋或僅限于表觀描述的有關羊肉品質的研究也正在向分子水平過渡。在分子生物學方面，DNA質量檢測、熒光定量PCR及PCR擴增在肉品摻假方面研究較多，但在針對檢測肉品新鮮程度方面鮮有相關報道。隨著貯藏時間的延長，肉類理化指標的變化規律研究報道較多，但沒有將理化指標尤其是新鮮度指標與DNA質量建立相關關系的研究。

發明內容

針對現有技術中的缺陷和不足，本發明的目的在于提供一種采用DNA及PCR技術鑒定新鮮羊肉貯藏時間的方法。

為了實現上述目的，本發明采用的技術方案由下述步驟組成：

1、分離提取貯藏的羊肉樣品中羊DNA，并對DNA含量進行檢測。

2、以提取的羊DNA為模板，對羊線粒體基因16S rRNA和內參基因β-globin2的引物分別進行熒光定量PCR擴增，獲得羊線粒體基因與內參基因擴增產物的ct值，計算Δct值，Δct值的計算公式為：Δct＝∣ct_{羊線粒體基因}-ct_內參基因∣。

3、-20℃貯藏溫度下，若DNA含量大于800μg/g，說明羊肉樣品是一級鮮肉；若DNA含量在800μg/g以下，說明羊肉樣品是一級鮮肉、二級鮮肉或變質肉，將羊肉樣品繼續貯藏1天，若DNA含量增加說明羊肉樣品是二級鮮肉，若DNA含量減小說明羊肉樣品是一級鮮肉或變質肉，變質肉通過氣味和顏色區分；羊肉樣品為一級鮮肉時，貯藏時間與Δct值擬合的數學方程為Y₁＝1.3559X-14.866，其中Y₁代表貯藏月數，X代表Δct值，R²＝0.8895；羊肉樣品為二級鮮肉時，貯藏時間與Δct值擬合的數學方程為Y₁＝-0.2003X+12.926，R²＝0.8127；