[發明專利]一種重組人β2-微球蛋白聚合物的制備方法

有效

• 申請號: 201810301759.1
• 申請日: 2018-04-04
• 公開（公告）號: CN108503864B
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 朱碧銀;楊耿周;魏鐘杰
• 申請（專利權）人: 菲鵬生物股份有限公司
• 主分類號: C08J3/24
• 分類號: C08J3/24;C08L89/00;C12N15/70;C12N15/12;C07K16/28
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 劉書芝

本發明提供了一種重組人β2?微球蛋白聚合物的制備方法，其中，所述方法包括：制備具有天然活性的重組人β2?微球蛋白；將所述具有天然活性的重組人β2?微球蛋白在第一緩沖液中透析；加入交聯劑，進行交聯反應，得到重組人β2?微球蛋白聚合物。本發明所提供的制備方法簡單，工藝成本低，且穩定性好，大大降低了生產、研發、檢測的成本，為生產、研發、檢測等方面對于具有天然活性的重組人β2?微球蛋白及其聚合物的應用帶來便利條件。

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，尤其涉及一種重組人β2-微球蛋白聚合物的制備方法。

背景技術

β2-微球蛋白(β2-MG)是一種小分子量(約12kD)的蛋白質，它由人體的淋巴細胞、單核細胞、間質細胞以及部分上皮細胞合成。合成后的β2-MG作為主要組織相容性抗原(HLA)的輕鏈廣泛存在于除紅細胞和胎盤滋養層細胞以外的其它多種細胞的細胞膜上，血液中半衰期為40min，正常人體每日產生100-200mg，其血中濃度相當穩定，約為2mg/L。盡管β2-MG的變化無特異性，但檢測體液中β2-MG，對一些疾病例如白血病、肺癌、肝癌、鼻咽癌和腎臟疾病的篩選、診斷以及疾病程度、治療效果和預后的評價，有一定意義。

此外，β2-微球蛋白作為一種中分子物質，是體外評價透析器性能的重要試劑，隨著高通量透析器及血液濾過器在國內的普及范圍不斷擴大，使用頻率不斷增加，高通量透析器及血濾器的品牌和種類也越來越多。作為評價透析器體外性能的重要試劑β2-微球蛋白的需求量也不斷增加。但由于來源有限，生產工藝比較復雜等原因，造成β2-微球蛋白的價格十分昂貴。

目前，β2-MG含量的測定時所采用的β2-MG的校準品常常為凍干粉，需要添加生理鹽水現配現用。校準品經生理鹽水多次稀釋后穩定性很差，無法長期存放，下次定標時需重新進行配制，費時費力，且價格昂貴、浪費嚴重。另外，由于β2-微球蛋白的穩定性很差，在醫療診斷行業，為了獲得β2-微球蛋白的抗體，需要采用穩定性更好的β2-微球蛋白作為免疫原來免疫。

目前，獲得β2-微球蛋白的途徑主要是天然提取和基因工程，天然提取的β2-微球蛋白來源有限，且患者尿液或體液中β2-微球蛋白的半衰期短，因此，天然β2-微球蛋白的制備成本高昂。總之，現有的β2-微球蛋白價格昂貴，制備工藝復雜且穩定性差，給生產、研發、檢測的帶來了居高不下的成本問題。

發明內容

本發明提供一種重組人β2-微球蛋白聚合物的制備方法，以解決現有的人β2-微球蛋白及其聚合物的價格昂貴，制備方法復雜且穩定性差的問題。

為解決上述問題，本發明提供一種重組人β2-微球蛋白聚合物的制備方法，包括：

制備重組人β2-微球蛋白；

將所述重組人β2-微球蛋白在第一緩沖液中透析；

加入交聯劑，進行交聯反應，得到重組人β2-微球蛋白聚合物。

優選地，所述“加入交聯劑，進行交聯反應，得到重組人β2-微球蛋白聚合物”，包括：

將透析的所述具有天然活性的重組人β2-微球蛋白與所述交聯劑按照體積比為10μL：15mL的比例混合，在室溫條件下反應30分鐘，得到反應物；

在所述反應物中加入第二緩沖液，室溫放置15分鐘終止所述交聯反應，得到所述具有天然活性的重組人β2-微球蛋白聚合物。

優選地，所述第一緩沖液為pH7.8的PBS緩沖液；

所述第二緩沖液為終濃度是50mM的pH8.8的Tris-HCl緩沖液。

優選地，所述“制備具有天然活性的重組人β2-微球蛋白”包括：