[發明專利]一種重組人β2-微球蛋白聚合物的制備方法

有效

• 申請號: 201810301759.1
• 申請日: 2018-04-04
• 公開（公告）號: CN108503864B
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 朱碧銀;楊耿周;魏鐘杰
• 申請（專利權）人: 菲鵬生物股份有限公司
• 主分類號: C08J3/24
• 分類號: C08J3/24;C08L89/00;C12N15/70;C12N15/12;C07K16/28
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 劉書芝

1.一種重組人β2-微球蛋白聚合物的制備方法，其特征在于，包括：

制備具有天然活性的重組人β2-微球蛋白；

將所述具有天然活性的重組人β2-微球蛋白在第一緩沖液中透析；

加入交聯劑，進行交聯反應，得到重組人β2-微球蛋白聚合物。

2.如權利要求1所述重組人β2-微球蛋白聚合物的制備方法，其特征在于，所述“加入交聯劑，進行交聯反應，得到重組人β2-微球蛋白聚合物”，包括：

將透析的所述具有天然活性的重組人β2-微球蛋白與所述交聯劑按照體積比為10μL：15mL的比例混合，在室溫條件下反應30分鐘，得到反應物；

在所述反應物中加入第二緩沖液，室溫放置15分鐘終止所述交聯反應，得到所述重組人β2-微球蛋白聚合物。

3.如權利要求2所述重組人β2-微球蛋白聚合物的制備方法，其特征在于，

所述第一緩沖液為pH7.8的PBS緩沖液；

所述第二緩沖液為終濃度是50mM的pH8.8的Tris-HCl緩沖液。

4.如權利要求1所述重組人β2-微球蛋白聚合物的制備方法，其特征在于，所述“制備具有天然活性的重組人β2-微球蛋白”包括：

獲取重組人β2-微球蛋白的基因序列并根據所述基因序列構建重組表達質粒，將所述重組表達質粒進行酶切得到目的序列，將切出的目的序列連入原核表達載體中，轉化表達宿主細胞，得到所述表達質粒菌株；

對所述表達質粒菌株進行原核表達，得到蛋白上清液；

純化所述蛋白上清液，得到純化重組蛋白；

將所述純化重組蛋白用第三緩沖液透析，按照預設質量比例加入肽鏈內切酶在23-28℃條件下進行酶切6-8小時，得到具有天然活性的重組人β2-微球蛋白。

5.如權利要求4所述重組人β2-微球蛋白聚合物的制備方法，其特征在于，所述原核表達載體為pET-32a原核表達載體；

所述表達宿主細胞為大腸桿菌Origami B DE3。

6.如權利要求4所述重組人β2-微球蛋白聚合物的制備方法，其特征在于，所述肽鏈內切酶為重組人腸激酶；

所述預設質量比例為具有天然活性的重組人β2-微球蛋白：重組人腸激酶＝50：1-100：1。

7.如權利要求6所述重組人β2-微球蛋白聚合物的制備方法，其特征在于，所述第三緩沖液為pH8.0的腸激酶酶切緩沖液；

所述腸激酶酶切緩沖液包括50mM Tris和1mM CaCl₂。

8.一種具有天然活性的重組人β2-微球蛋白診斷試劑盒，其特征在于，包括如權利要求1～7任一項所述的制備方法獲得的具有天然活性的重組人β2-微球蛋白聚合物制備的標準品。

9.一種如權利要求1-7中任一項所述重組人β2-微球蛋白聚合物的制備方法所制備的具有天然活性的重組人β2-微球蛋白聚合物在制備單克隆抗體的應用。

10.一種如權利要求1-7任一項所述重組人β2-微球蛋白聚合物的制備方法所制備的具有天然活性的重組人β2-微球蛋白聚合物在制備多克隆抗體的應用，包括：

基于免疫動物，以重組人β2-微球蛋白聚合物作為免疫原進行免疫，得到重組人β2-微球蛋白多克隆抗體。