[發明專利]一種用于檢測乙肝癌變多態性的試劑盒

在審

• 申請號: 201810299579.4
• 申請日: 2018-04-04
• 公開（公告）號: CN108315420A
• 公開（公告）日: 2018-07-24
• 發明（設計）人: 鄧鑫
• 申請（專利權）人: 廣西中醫藥大學附屬瑞康醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京天盾知識產權代理有限公司 11421
• 代理人: 賀麗娟

本發明公開了一種用于檢測乙肝癌變多態性的試劑盒，所述乙肝癌變易感基因檢測的多態性位點為HLA?DQrs9275319和STAT4rs2242480，所述試劑盒包括PCR反應液1、PCR反應液2、HLA?DQ反向擴增引物、HLA?DQ測序引物、載玻片、蓋玻片、洗脫液和緩沖液。本發明方便觀察結果，具有簡便實用、特異性高、靈敏度強、適于基層單位及現場快速檢測的優點。

技術領域

本發明涉及核酸檢測技術領域，具體是一種用于檢測乙肝癌變多態性的試劑盒。

背景技術

肝癌是全世界致死率高居第三的惡性腫瘤，也是中國常見的一種惡性疾病。全球每 年約有70萬人死于肝癌。肝癌中肝細胞肝癌(Hepato Cellular Carcinoma，HCC)最常見， 國際癌癥研究機構2000年的調查顯示，HCC患者中80％與異性肝炎病毒和丙型肝炎病毒 有關。病史調查表明，中國的肝癌病人中80％以上都有乙肝病史。根據衛生部發布的數據，中國目前總計有9300萬乙肝病人，占全世界乙肝患者總數的三分之一以上。

我國1992年普及乙肝疫苗注射后，肝癌發病率已有所下降。但在之前出生的人，約8％～9％呈乙肝表面抗原(HBsAg)陽性。因此，中國大陸在未來40～50年肝細胞癌仍將是一個重要的公共健康問題。由于原發性肝癌(HCC)患者出現臨床表現常屬疾病晚期，死亡率高，因此，篩查高危因素用于臨床預測乙肝病毒感染的患者并發HCC的風險，有利于 疾病的早期發現和治療。

主要組織相容性復合體(MHC)，參與免疫反應的調節，尤其是T細胞介導的細胞免疫 反應。人類MHC主要為人白細胞抗原(Human Leukocyte Antigen，HLA)，位于人的6號染色體，分為Ⅰ類和Ⅱ類。MHCⅡ類分子只是在少數細胞中表達，如樹突狀細胞、B淋巴細 胞等，其中最具代表性的為HLA-DR和HLA-DQ抗原。HLA-DR，-DQ通過MHCⅡ類分子限制 的T細胞對外來抗原的識別，在介導淋巴細胞活化、抗原遞呈等機體免疫應答和免疫調 節過程中發揮重要的作用。

全基因組關聯研究表明，HLA-DQ基因簇上的SNPs與肝硬化、HBV和HCV引起的HCC風險性相關，尤其是位于與HCC具有生物學相關性的HLA-DQB1基因和HLA-DQA2基因之 間的rs9275319位點。信號轉導和激活因子(STAT)家族是近年來發現的一類轉錄因子，包 括STAT1，STAT2，STAT3，STAT4，STAT5a，STAT5b，STAT6。STAT家族是介導細胞因子、 生長因子信號通路上啟動蛋白轉錄的重要轉錄因子，它們在許多信號通路的細胞分子事 件中都起到重要作用，例如細胞分化、細胞增殖和存活。

STAT4位于染色體2q32.2-2q32.3，是T細胞，NK細胞，樹突狀細胞，核巨噬細胞等免疫調控細胞內IL-12/STAT4/IFN-γ信號傳導途徑的關鍵組成元件，是IL-12誘導免疫 調控細胞產生IFN-γ的關鍵調控因子，介導IL-12的免疫反應與調節T細胞的分化。國 外研究證實，STAT4基因多態性參與多種自身免疫性疾病的發生。STAT4通過信號傳導， 使白細胞介素12誘導產生IFN-γ。IFN-γ是一種多效性細胞因子，在宿主防御中具有重 要的作用。由于STAT4基因多態性，激活的IFN-γ可能會降低它的抗病毒和抗腫瘤活性， 通過研究證實：STAT4中的G等位基因的單核苷酸多態性與乙肝癌變的高風險有關。

HLA-DQ基因和STAT4基因是乙肝患者罹患肝癌的關鍵易感基因，為人類進一步研究 如何降低肝癌發病風險、治療乙肝和肝癌指出了新的方向。通過檢測HLA-DQ基因和STAT4 基因的分型，篩查肝癌的易感人群，從而提前對易感人群進行相應的綜合干預和預防措施， 降低肝癌發病風險。因此進行HLA-DQ和STAT4位點的基因分型檢測對于預防乙肝癌變有 著非常重要的意義。