[發明專利]定量檢測血清淀粉樣蛋白A的時間分辨熒光免疫層析試紙條及其制備方法

在審

• 申請號: 201810298348.1
• 申請日: 2018-04-04
• 公開（公告）號: CN108680751A
• 公開（公告）日: 2018-10-19
• 發明（設計）人: 劉佳佳;邵偉;王麗君
• 申請（專利權）人: 蘇州遵道生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 連平

本發明揭示了一種定量檢測SAA的時間分辨熒光免疫層析試紙條的制備方法，包括：硝酸纖維素膜包被檢測線與質控線，檢測線使用SAA檢測抗體，質控線使用抗SAA捕獲抗體的二抗；制備結合墊，其包括：含有納米增強型時間分辨熒光微球的PBS中，加入EDC與NHS，離心，沉淀經PBS洗滌后溶解于PBS中；SAA捕獲抗體使用洗滌液離心洗滌；將洗滌后的SAA捕獲抗體與溶解有熒光微球的PB混合，以使SAA捕獲抗體與熒光微球偶聯，將偶聯后的混合液噴涂于載體。

技術領域

本發明涉及臨床免疫學檢測領域，具體涉及一種定量檢測血清淀粉樣蛋白A的時間分辨熒光免疫層析試紙條及其制備方法。

背景技術

血清淀粉樣蛋白A(serum amyloid A，SAA)是一種急性時限反應蛋白，屬于載脂蛋白家族中的異質類蛋白質，相對分子量約12000D。在急性時限反應中，經IL-1、IL-6和TNF刺激，SAA在肝臟中由被激活的巨噬細胞和纖維母細胞合成，可升高到最初濃度的100-1000倍，但半衰期極短，只有50分鐘左右。SAA與高密度脂蛋白(HDL)有關，它能在炎癥期間調節高密度脂蛋白的代謝。SAA一個特別重要的特性是其降解產物能以淀粉樣蛋白A(AA)原纖維的方式沉積在不同的器官中，在慢性炎癥疾病中這是一種嚴重的并發癥。

與C反應蛋白(CRP)類似，SAA的含量濃度是反映感染性疾病早期炎癥的敏感指標，有助于診斷炎癥、評估其活性、監控其活動及治療。但是，SAA檢測在診斷發生病毒感染、腎移植排斥反應的患者(特別是進行免疫抑制治療的患者)以及用腎上腺皮質激素治療的囊性纖維化患者方面，比C反應蛋白更確鑿。研究發現，在患炎性關節炎的案例中，SAA與疾病活動性的關系最密切。同時檢測C反應蛋白和SAA能提高對感染的診斷靈敏度。對于淀粉樣蛋白A淀粉樣變性患者，以將SAA水平回復至正常為宗旨的治療，能改善病情。

對于SAA的檢測，目前使用的方法主要是化學發光法、免疫比濁、膠體金等，但是這些方法都有各自的特點及不足。化學發光方法需要大型儀器，且耗時長久，成本高昂；免疫比濁靈敏度低，準確度差；膠體金法不能定量檢測。

發明內容

本發明的目的在于提供一種高靈敏度、高特異性的SAA臨床定量檢測試紙條。

為實現上述發明目的，本發明提供一種定量檢測SAA的時間分辨熒光免疫層析試紙條的制備方法，包括：

硝酸纖維素膜包被檢測線與質控線，所述檢測線使用SAA檢測抗體，所述質控線使用抗SAA捕獲抗體的二抗；

制備結合墊，其包括：

含有納米增強型時間分辨熒光微球的PBS中，加入終濃度為10mg/ml的EDC與NHS，離心，沉淀經PBS洗滌后溶解于PBS中；

SAA捕獲抗體使用抗體洗滌液離心洗滌；

將洗滌后的SAA捕獲抗體與所述溶解有熒光微球的PBS混合，以使SAA捕獲抗體與熒光微球偶聯；

將偶聯后的混合液噴涂到載體；

其中，PBS為PH6-7、濃度0.05mol/L。

作為本發明一實施方式的進一步改進，熒光微球直徑為100nm-300nm。

作為本發明一實施方式的進一步改進，SAA捕獲抗體與熒光微球混合的重量比是1/10-1/20。

作為本發明一實施方式的進一步改進，SAA捕獲抗體與熒光微球偶聯后，經封閉液封閉，然后噴涂到載體，所述封閉液含有質量百分比為0.1-1％的卡澤35及濃度為10-50mmol/ml的甘氨酸。

作為本發明一實施方式的進一步改進，抗體洗滌液為PH7-8的0.05mol/L PB緩沖液。

作為本發明一實施方式的進一步改進，載體為玻璃纖維膜。