[發明專利]一種利用微波酸水解和陰離子交換色譜-脈沖安培法分析多糖中單糖組成的檢測方法在審
| 申請號： | 201810295008.3 | 申請日： | 2018-04-04 |
| 公開（公告）號： | CN110346457A | 公開（公告）日： | 2019-10-18 |
| 發明（設計）人： | 張麗娟;何燕利 | 申請（專利權）人： | 青島大學附屬醫院 |
| 主分類號： | G01N30/02 | 分類號： | G01N30/02;G01N30/06 |
| 代理公司： | 青島合創知識產權代理事務所(普通合伙) 37264 | 代理人： | 王曉曉 |
| 地址： | 266000 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 陰離子交換色譜 單糖組成 脈沖 酸水解 微波 單模微波 蛋白水解 多糖降解 方法使用 樣品降解 分析 可降解 酸用量 檢測 水解 單糖 上樣 應用 | ||
1.一種利用微波酸水解和陰離子交換色譜-脈沖安培法分析多糖中單糖組成的檢測方法，其特征在于：所述檢測方法包括以下步驟：
(1) 稱取待測多糖，用HCl溶解待測多糖得到溶解液，取所述溶解液使用單模微波蛋白水解儀進行微波酸水解；
(2) 微波酸水解后的水解液離心濃縮除酸；
(3) 離心后的樣品中添加甲醇，離心濃縮除殘留HCl；
(4) 將得到的干燥樣品用水溶解，離心取上清；
(5) 離心后的上清液進行陰離子交換色譜-脈沖安培法分析，得到色譜圖；
(6) 制備多種單糖的標準曲線；
(7) 將步驟(5)得到的色譜圖與步驟(6)中單糖的標準曲線比對并分析計算，確定待測多糖中的單糖組分。
2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：所述步驟(1)中待測多糖用1 mol/L -5 mol/L HCl溶解多糖得到溶解液。
3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：所述步驟(1)中微波酸水解的條件是：功率80 w-100 w，溫度80 ℃-100 ℃，水解時間5 min-15 min。
4.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于：所述步驟(1)中微波酸水解的條件是：功率100 w，溫度100 ℃，水解時間10 min。
5.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：所述步驟(5)中的色譜條件為：
分析柱：Thermo Scientific Dionex Carbo PACTM PA10，4.0 mm×250 mm，
保護柱：Thermo Scientific Dionex Carbo PACTM PA10，4.0 mm×50 mm，
淋洗液：0-15 min 使用18 mM NaOH；15.1-30 min 使用18 mM NaOH和150 mMCH3COONa的混合液，流速：1.0 mL/min，
進樣體積：10 μL，
柱溫：30 ℃。
6.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：所述步驟(6)中的單糖包括巖藻糖、半乳糖胺、葡萄糖胺、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、葡萄糖醛酸、甘露糖醛酸和古羅糖醛酸。
7.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：所述步驟(6)中單糖標準曲線的濃度范圍為0.00005 mg/mL -0.05 mg/mL。
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