[發明專利]一種天然組織來源的髓核脫細胞材料的制備方法有效
| 申請號： | 201810294591.6 | 申請日： | 2018-04-04 |
| 公開（公告）號： | CN108310466B | 公開（公告）日： | 2021-04-06 |
| 發明（設計）人： | 林賢豐;許家齊;方向前;范順武;王晟毓 | 申請（專利權）人： | 浙江大學 |
| 主分類號： | A61L27/36 | 分類號： | A61L27/36;A61L27/50 |
| 代理公司： | 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 李冉 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 天然 組織 來源 髓核脫 細胞 材料 制備 方法 | ||
1.一種天然組織來源的髓核脫細胞材料的制備方法，其特征在于，該方法具體包括以下步驟：
(1)取宰殺12h以內任意哺乳動物胸5到腰6脊椎，用刀分離出椎間盤，然后切開纖維環取出髓核；用含蛋白酶抑制劑的PBS緩沖液漂洗髓核3次，每次30min，去除血液，貼附的脂肪碎片和其他雜質；
(2)在含蛋白酶抑制劑的PBS緩沖液中，在4℃溫度下用搖床100rpm震蕩24-48小時；然后用液氮凍融3個循環；
(3)在含NaCl的PBS緩沖液中，加入混合抗菌液，在4℃溫度下用搖床100rpm震蕩24-48小時；
(4)在含TritonX的PBS緩沖液中，加入混合抗菌液，在4℃溫度下用搖床100rpm震蕩24-48小時；
(5)在含SDS的PBS緩沖液中，加入混合抗菌液，在4℃溫度下用搖床100rpm震蕩24-48小時；
(6)在含DNA酶的PBS緩沖液中，加入混合抗菌液，37℃搖床120rpm震蕩12-24小時；
步驟(2)-(6)中，每個步驟完成后均用生理鹽水沖洗8小時；
所述含蛋白酶抑制劑的PBS緩沖液，蛋白酶抑制劑濃度為10-20KIU/mL；
所述含NaCl的PBS緩沖液為濃度1M-1.5M的NaCl的PBS緩沖液；
所述含TritonX的PBS緩沖液為濃度0.05％-0.1％的TritonX-100或Triton X-200的PBS緩沖液；
所述含SDS的PBS緩沖液為濃度0.1％-0.5％的SDS的PBS緩沖液；
所述含DNA酶的PBS緩沖液為濃度為1-2mg/mLDNA酶PBS緩沖液；
所述混合抗菌液中青霉素和鏈霉素的濃度分別為20KIU/mL，20g/mL；青霉素和鏈霉素的比例為1：1，加入的混合抗菌液與原溶液體積比為1：1。
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