[發明專利]一種基于SRAP標記鑒定蝴蝶蘭品種的方法

在審

• 申請號: 201810289958.5
• 申請日: 2018-04-03
• 公開（公告）號: CN108456720A
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發明（設計）人: 曹智;王昌偉;丁可武;金美芳
• 申請（專利權）人: 福建師范大學福清分校
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12Q1/6895
• 代理公司: 福州市眾韜專利代理事務所(普通合伙) 35220
• 代理人: 陳智雄;黃秀婷

本發明公開了一種基于SRAP標記鑒定蝴蝶蘭品種的方法，包括以下步驟：提取蝴蝶蘭基因組DNA；利用SRAP引物組合，以蝴蝶蘭基因組DNA為模板進行PCR擴增；將擴增后的DNA片段，利用14g·L^?1的瓊脂糖凝膠電泳檢測SRAP擴增產物；對電泳結果進行分析，進而鑒定蝴蝶蘭品種；所述SRAP引物組合中的正向引物選自me1?me10(SEQ ID No.1?10)，反向引物選自em1?em10(SEQ ID No.11?20)。本發明的優點在于：本發明提供的方法，一次性將多種蝴蝶蘭品種鑒定處理，簡單高效；本發明提供的方法，引物用量更少，僅需0.4μmol·L?1。

技術領域

本發明屬于農業領域，具體地涉及一種基于SRAP標記鑒定蝴蝶蘭品種的方法。

背景技術

蝴蝶蘭(Phalaenopsis aphrodite Rchb.F.)為蘭科蝴蝶蘭屬，原產于亞熱帶雨林地區，為附生性蘭花。蝴蝶蘭白色粗大的氣根露在葉片周圍，除了具有吸收空氣中養分的作用外，還有生長和光合作用。新春時節，蝴蝶蘭植株從葉腋中抽出長長的花梗，并且開出形如蝴蝶飛舞般的花朵，深受花迷們的青睞，素有“洋蘭王后”之稱。種類繁多，僅靠傳統鑒定的方法是很難提供可靠證據的。

隨著生物技術的發展及其在作物育種中應用的不斷深入，科學家們提出了應用分子標記技術進行農作物品種的遺傳和真實性鑒定。SRAP操作簡便，使用長17-18bp的引物以及50℃的退火溫度，保證了結果的穩定性。通過改變SRAP引物3’端3個選擇堿基可得到更多的引物，由于上游與下游引物可自由組配，因此用少數的引物可進行多種組合，大大減少了合成引物的費用，同時也提高了引物的使用率。SRAP操作簡便、擴增結果穩定、高效、重復性好等優點，已經被應用于圖譜構建、比較基因組學、遺傳多樣性分析和標定基因的研究中。

迄今為止，雖然已經有人將SRAP標記應用在蝴蝶蘭親緣關系分析上，但是尚未見應用SRAP標記一次性進行多種蝴蝶蘭品種鑒定的報道。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于克服現有SRAP標記不能一次性將多種蝴蝶蘭品種鑒定，而開發了一種快速、簡便且高效地基于SRAP標記鑒定蝴蝶蘭品種的方法。

本發明的目的是提供一種基于SRAP標記鑒定蝴蝶蘭品種的方法。

本發明的技術方案如下：

一種基于SRAP標記鑒定蝴蝶蘭品種的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)提取蝴蝶蘭基因組DNA；

(2)利用SRAP引物組合，以蝴蝶蘭基因組DNA為模板進行PCR擴增；

(3)將擴增后的DNA片段，利用14g·L^-1的瓊脂糖凝膠電泳檢測SRAP擴增產物；

(4)對電泳結果進行分析，進而鑒定蝴蝶蘭品種；

所述SRAP引物組合中的正向引物選自me1-me10(SEQ ID No.1-10)，反向引物選自em1-em10(SEQ ID No.11-20)。

優選的，所述SRAP引物組合中的正向引物為me1(SEQ ID No.1)。

進一步優選的，所述SRAP引物組合中的反向引物為em1(SEQ ID No.11)。

進一步優選的，所述SRAP引物組合中的反向引物為em10(SEQ ID No.20)。