[發(fā)明專利]一種發(fā)酵生產鹽霉素的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810288745.0
• 申請日: 2018-03-30
• 公開（公告）號: CN108342426A
• 公開（公告）日: 2018-07-31
• 發(fā)明（設計）人: 鐘迎東;何建剛;楊林;柳顯明;陳峰
• 申請（專利權）人: 內蒙古拜克生物有限公司
• 主分類號: C12P17/18
• 分類號: C12P17/18;C12N1/20;C07D493/20;C12R1/47
• 代理公司: 北京精金石專利代理事務所(普通合伙) 11470
• 代理人: 張黎

1.一種發(fā)酵生產鹽霉素的方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)一級種子培養(yǎng)：將產鹽霉素的鏈霉菌的孢子或菌絲體接種于一級種子培養(yǎng)基中，進行一級培養(yǎng)得到一級種子液；

(2)二級種子培養(yǎng)：將步驟(1)中得到的一級種子液接種于二級種子培養(yǎng)基中，進行二級培養(yǎng)得到二級種子液；

(3)發(fā)酵培養(yǎng)：將步驟(2)中得到的二級種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵培養(yǎng)，得到鹽霉素發(fā)酵液；

所述步驟(1)的一級種子培養(yǎng)基中還含有阿拉伯膠和硅油，其含量均為0.01-0.1g/L；

所述步驟(2)的二級種子培養(yǎng)基中還含有十二烷基苯磺酸鈉和硬脂酸鎂，其含量均為0.01-0.1g/L。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種發(fā)酵生產鹽霉素的方法，其特征在于：步驟(1)中所述的接種的接種量為1-6％；

步驟(1)中所述的一級種子培養(yǎng)基的成分及用量為葡萄糖15g/L，黃豆粉18g/L，玉米漿20g/L，磷酸二氫鉀2.0g/L，酵母膏粉0.3g/L和碳酸鈣0.2g/L；pH為6.5-7.0；

步驟(1)中所述的一級培養(yǎng)在容積為5-10L的種子發(fā)酵罐中進行；一級種子發(fā)酵罐的裝液量為其容積的15-35％；

步驟(1)中所述的一級培養(yǎng)的條件為：罐溫為28-32℃，攪拌轉速為250-300r/min，罐壓為0.05-0.08MPa，空氣流量為0.5-0.8vvm，培養(yǎng)時間為10-14h。

3.根據(jù)權利要求1所述的一種發(fā)酵生產鹽霉素的方法，其特征在于：步驟(2)中所述的接種的接種量為4-10％；

步驟(2)中所述的二級種子培養(yǎng)基的成分及用量為葡萄糖20g/L，黃豆粉10g/L，玉米漿15g/L，磷酸二氫鉀2.0g/L，酵母膏粉0.4g/L和碳酸鈣0.2g/L；pH為6.5-7.0；

步驟(2)中所述的二級培養(yǎng)在容積為5-10L的種子發(fā)酵罐中進行；二級種子發(fā)酵罐的裝液量為其容積的12-30％；

步驟(2)中所述的二級培養(yǎng)的條件為：罐溫為30-33℃，攪拌轉速為200-300r/min，罐壓為0.05-0.08MPa，空氣流量為0.1-1.2vvm，培養(yǎng)時間為12-16h。

4.根據(jù)權利要求1所述的一種發(fā)酵生產鹽霉素的方法，其特征在于：步驟(3)中所述的接種的接種量為8-15％；

步驟(3)中所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的成分及用量為蔗糖15.0g/L，葡萄糖10.0g/L，黃豆粉8.0g/L，玉米淀粉5.0g/L，酒石酸2.0g/L，氯化鐵2.0g/L，磷酸二氫鉀0.2g/L，硫酸鎂2.0g/L，氯化鈉0.1g/L和豆油150g/L；pH為6.5-7.0；

步驟(3)中所述的發(fā)酵培養(yǎng)在容積為50L的發(fā)酵罐中進行；發(fā)酵罐的裝液量為其容積的50-75％；

步驟(3)中所述的發(fā)酵培養(yǎng)的條件為：罐溫為30-33℃，攪拌轉速為250-300r/min，罐壓為0.05-0.08MPa，空氣流量為0.5-1.5vvm，培養(yǎng)時間為5-10d。

5.一種從權利要求1-4任一項所述的鹽霉素發(fā)酵液中提取鹽霉素的方法，其特征在于：具體步驟如下：

(1)將鹽霉素發(fā)酵液酸化，調節(jié)pH為4.5-6，后向酸化的發(fā)酵液中加入絮凝劑，在20-40℃下保溫15-30分鐘后得到絮凝后的混合物A；

(2)向步驟(1)中得到的混合物A中加入助濾劑攪拌均勻后在2℃下進行真空處理，后超聲得到混合物B，將混合物B轉入板框壓濾機中進行過濾，棄去濾液，得到濾餅C；

(3)將步驟(2)中得到的濾餅C進行閃蒸干燥，得到菌粉D；

(4)將步驟(3)中得到的菌粉D用乙醇溶液浸提兩次，合并兩次浸提得到的浸提液，得到浸提液E；

(5)向步驟(4)得到的浸提液E中加入活性炭進行脫色，將脫色后的浸提液過濾去除活性炭后，濃縮并進行降溫結晶得到鹽霉素濕晶體F；

(6)將步驟(5)中得到的鹽霉素濕晶體F轉入雙錐干燥機減壓烘干，即可得到高純度的鹽霉素晶體。