[發(fā)明專利]一種玻璃化冷凍液及其冷凍方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810287794.2
• 申請(qǐng)日: 2018-04-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108244100A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 余裕爐;左曉玲;劉洪君;嚴(yán)飛;戴甄
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 成都艾偉孚生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A01N1/02
• 分類號(hào): A01N1/02
• 代理公司: 成都玖和知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51238
• 代理人: 胡琳梅

1.紫杉醇在用于制備玻璃化冷凍液中的用途。

2.一種添加紫杉醇的玻璃化冷凍液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的玻璃化冷凍液，其特征在于，所述玻璃化冷凍液中紫杉醇的濃度為0.1～1.5μmol/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的玻璃化冷凍液，其特性在于，所述玻璃化冷凍液包括基礎(chǔ)冷凍液、冷凍液一和冷凍液二；

其中所述基礎(chǔ)冷凍液包含M199培養(yǎng)液、胎牛血清、緩沖劑和紫杉醇；

所述冷凍液一在基礎(chǔ)冷凍液的基礎(chǔ)上添加滲透性冷凍保護(hù)劑；

所述冷凍液二在基礎(chǔ)冷凍液的基礎(chǔ)上添加滲透性冷凍保護(hù)劑和蔗糖。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的玻璃化冷凍液，其特征在于，所述基礎(chǔ)冷凍液成分包含：M199培養(yǎng)液作為基礎(chǔ)液,NaHCO₃ 5～10mmol/L、HEPES 10～14mmol/L、HEPES-Na 10～15mmol/L、青霉素0.065～0.077g/L、鏈霉素0.05～0.09g/L、胎牛血清(體積含量)10％～20％、紫杉醇0.1～1.5μmol/L。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的玻璃化冷凍液，其特征在于，所述冷凍液一和冷凍液二的滲透性冷凍保護(hù)劑為乙二醇和二甲基亞砜。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的玻璃化冷凍液，其特征在于，所述冷凍液一添加的滲透性冷凍保護(hù)劑為：體積含量5.5％～7.5％的乙二醇和體積含量6.0％～7.5％的二甲基亞砜。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的玻璃化冷凍液，其特征在于，所述冷凍液二添加的滲透性冷凍保護(hù)劑為：體積含量15％～20％的乙二醇和體積含量15％～20％的二甲基亞砜；

添加蔗糖濃度為0.5～1.0mol/L。

9.權(quán)利要求4所述玻璃化冷凍液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)制備基礎(chǔ)冷凍液；

2)步驟1)的基礎(chǔ)冷凍液的基礎(chǔ)上添加滲透性冷凍保護(hù)劑，得冷凍液一；

3)步驟1)的基礎(chǔ)冷凍液基礎(chǔ)上添加滲透性冷凍保護(hù)劑和蔗糖，得冷凍液二。

10.權(quán)利要求4所述的玻璃化冷凍液對(duì)卵母細(xì)胞進(jìn)行玻璃化冷凍的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將基礎(chǔ)冷凍液、冷凍液一、冷凍液二在室溫平衡25min；

2)將卵母細(xì)胞移到基礎(chǔ)冷凍液中處理5～8min；

3)處理后將卵母細(xì)胞移入冷凍液一中平衡20～40s；

4)移入冷凍液二中，25s內(nèi)將卵母細(xì)胞吸入OPS管，迅速投入液氮冷凍保存。