[發明專利]一種基于一步法RPA技術檢測黃瓜綠斑駁花葉病毒的方法

在審

• 申請號: 201810287510.X
• 申請日: 2018-04-03
• 公開（公告）號: CN108456746A
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發明（設計）人: 邱艷紅;王超楠;張永江;朱水芳
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/94
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;陳曉慶

1.用于檢測黃瓜綠斑駁花葉病毒的引物對，由引物CGMMV-RPA-F和引物CGMMV-RPA-R組成；

所述CGMMV-RPA-F為如下(a1)或(a2)；

(a1)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；

(a2)將序列1經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功能的DNA分子；

所述CGMMV-RPA-R為如下(a3)或(a4)；

(a3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；

(a4)將序列2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的DNA分子。

2.用于檢測黃瓜綠斑駁花葉病毒的重組酶聚合酶擴增試劑，其含有權利要求1所述的引物對。

3.根據權利要求2所述的試劑，其特征在于：所述引物CGMMV-RPA-F和所述引物CGMMV-RPA-R的摩爾量相同。

4.用于檢測黃瓜綠斑駁花葉病毒的重組酶聚合酶擴增試劑盒，其含有權利要求1所述的引物對或權利要求2或3所述的試劑。

5.權利要求1所述的引物對或權利要求2或3所述的試劑或權利要求4所述的試劑盒在如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4)或(b5)或(b6)中的應用：

(b1)檢測或輔助檢測黃瓜綠斑駁花葉病毒；

(b2)制備檢測或輔助檢測黃瓜綠斑駁花葉病毒的產品；

(b3)檢測或輔助檢測待測植物材料是否感染黃瓜綠斑駁花葉病毒；

(b4)制備檢測或輔助檢測待測植物材料是否感染黃瓜綠斑駁花葉病毒的產品；

(b5)檢測或輔助檢測待測病毒是否為黃瓜綠斑駁花葉病毒；

(b6)制備檢測或輔助檢測待測病毒是否為黃瓜綠斑駁花葉病毒的產品。

6.一種檢測或輔助檢測待測植物材料是否感染黃瓜綠斑駁花葉病毒的方法，包括如下步驟：

(c1)提取待測植物材料的總RNA；

(c2)以步驟(c1)得到的總RNA為模板，采用權利要求1所述的引物對進行一步法RPA擴增，得到擴增產物；按照如下方法判斷待測植物材料是否感染黃瓜綠斑駁花葉病毒：

若所述擴增產物含有368bp的DNA片段，則所述待測植物材料感染或候選感染黃瓜綠斑駁花葉病毒；若所述擴增產物不含有368bp的DNA片段，則所述待測植物材料未感染或候選未感染黃瓜綠斑駁花葉病毒。

7.一種檢測或輔助檢測待測病毒是否為黃瓜綠斑駁花葉病毒的方法，包括如下步驟：

(d1)提取待測病毒的總RNA；

(d2)以步驟(d1)得到的總RNA為模板，采用權利要求1所述的引物對進行一步法RPA擴增，得到擴增產物；按照如下方法判斷待測病毒是否為黃瓜綠斑駁花葉病毒：

若所述擴增產物含有368bp的DNA片段，則所述待測病毒為或候選為黃瓜綠斑駁花葉病毒；若所述擴增產物不含有368bp的DNA片段，則所述待測病毒不為或候選不為黃瓜綠斑駁花葉病毒。

8.根據權利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述368bp的DNA片段為序列表中序列3所示的DNA片段。

9.根據權利要求6-8任一所述的方法，其特征在于：所述一步法RPA擴增時，所述引物對中的兩條引物在反應體系中的摩爾量相同。

10.根據權利要求6-9任一所述的方法，其特征在于：所述一步法RPA擴增的條件為(40-42)℃反應(30-45)min。