[發(fā)明專利]一種減弱環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶產(chǎn)物抑制的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810286129.1
• 申請日: 2018-04-03
• 公開（公告）號: CN108277217B
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李才明;李兆豐;陳雙娣;顧正彪;李澤西;洪雁;程力
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: C12N11/02
• 分類號: C12N11/02;C12N9/10;C12P19/18
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

本發(fā)明涉及一種減弱環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶產(chǎn)物抑制的方法，屬于酶技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供了一種減弱環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶產(chǎn)物抑制的方法，所述方法為先配制明膠溶液，將得到的明膠溶液中加入環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶中并混合均勻，然后將得到的混合溶液倒入平板中，成一定厚度，將倒入平板中的溶液進(jìn)行冷卻吸附，得到凝膠薄膜，再將得到的凝膠薄膜切成小碎片，用戊二醛溶液浸泡交聯(lián)，最后將凝膠碎片洗凈，得到可減弱環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶產(chǎn)物抑制的固定化環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶。該方法不僅能有效減弱環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的產(chǎn)物抑制現(xiàn)象，而且制備工藝簡單，成本較低，制得的固定化酶穩(wěn)定性和重復(fù)利用性好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種減弱環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶產(chǎn)物抑制的方法，屬于酶技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

環(huán)糊精憑著內(nèi)疏外親的性質(zhì)能包合許多疏水性客體分子而改變他們的理化性質(zhì)，在各個領(lǐng)域有許多廣泛的應(yīng)用。目前，工業(yè)上環(huán)糊精均是通過環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶環(huán)化反應(yīng)作用于淀粉底物進(jìn)行合成，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，體系中環(huán)糊精含量逐漸升高，部分環(huán)糊精會與酶自身結(jié)合影響其活性，進(jìn)而影響反應(yīng)效率，造成產(chǎn)物抑制現(xiàn)象。

目前，研究者主要通過定點突變、添加有機(jī)試劑和膜分離手段來解決環(huán)糊精生產(chǎn)過程中的產(chǎn)物抑制問題。但是，使用定點突變技術(shù)一生物技術(shù)手段改造環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶雖然簡單易行、重復(fù)性好，但往往引起酶其他性質(zhì)(如酶活力、產(chǎn)物特異性、熱穩(wěn)定性等)的改變；使用膜分離技術(shù)雖能根據(jù)分子量大小對產(chǎn)物中環(huán)糊精進(jìn)行有效分離從而減弱產(chǎn)物抑制，但淀粉極其引起膜的堵塞，效果不顯著，操作繁瑣，成本較高；添加有機(jī)試劑一方面會導(dǎo)致成本的增加，另一方面試劑的殘留限制了環(huán)糊精在食品領(lǐng)域的應(yīng)用。

同時，這三種手段中采用的酶為游離的，均不可重復(fù)使用。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種減弱環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶產(chǎn)物抑制的方法，該方法不僅能有效減弱環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的產(chǎn)物抑制現(xiàn)象，而且制備工藝簡單，成本較低，制得的固定化酶穩(wěn)定性和重復(fù)利用性好。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明提供了一種減弱環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶產(chǎn)物抑制的方法，所述方法為將環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶進(jìn)行固定化來減弱其產(chǎn)物抑制；所述固定化為先配制明膠溶液，將得到的明膠溶液中加入環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶中并混合均勻，然后將得到的混合溶液倒入平板中，成一定厚度，將倒入平板中的溶液進(jìn)行冷卻吸附，得到凝膠薄膜，再將得到的凝膠薄膜切成小碎片，用戊二醛溶液浸泡交聯(lián)，最后將凝膠碎片洗凈，得到可減弱環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶產(chǎn)物抑制的固定化環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶；所述產(chǎn)物為環(huán)糊精。

在本發(fā)明的一種實施方式中，所述產(chǎn)物為β-環(huán)糊精。

在本發(fā)明的一種實施方式中，所述明膠溶液的溶質(zhì)質(zhì)量百分比濃度為5％-12％。

在本發(fā)明的一種實施方式中，所述將得到的明膠溶液中加入環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶中并混合均勻，要求明膠溶液預(yù)先恒溫至45℃，環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶加入量為溶質(zhì)質(zhì)量的5％-30％。

在本發(fā)明的一種實施方式中，所述將得到的混合溶液倒入平板中，要求將得到的混合溶液立即倒入平板中，防止分層。

在本發(fā)明的一種實施方式中，所述倒入平板的厚度為2-8mm。

在本發(fā)明的一種實施方式中，所述冷卻為在4℃下進(jìn)行放置冷卻，冷卻吸附時間為30-90min。

在本發(fā)明的一種實施方式中，所述戊二醛溶液濃度為0.1％-0.5％。

在本發(fā)明的一種實施方式中，所述交聯(lián)溫度為0-30℃，交聯(lián)時間為0.5-3h。

本發(fā)明提供了上述減弱環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶產(chǎn)物抑制的方法制備得到的環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶。

本發(fā)明提供了上述減弱環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶產(chǎn)物抑制的方法在生產(chǎn)環(huán)糊精及其衍生物方面的應(yīng)用。