[發明專利]適用于評價卷煙煙氣冷凝物遺傳毒性的TK基因突變測試方法、致突變強度確定方法

有效

• 申請號: 201810284779.2
• 申請日: 2018-04-02
• 公開（公告）號: CN108531554B
• 公開（公告）日: 2021-10-01
• 發明（設計）人: 尚平平;華辰鳳;李翔;喬梁峻;謝復煒
• 申請（專利權）人: 中國煙草總公司鄭州煙草研究院
• 主分類號: C12Q1/6827
• 分類號: C12Q1/6827
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

本發明涉及適用于評價卷煙煙氣冷凝物遺傳毒性的TK基因突變測試方法、致突變強度確定方法，屬于卷煙危害評價技術領域。本發明的遺傳毒性測試方法及致突變強度確定方法采用卷煙煙氣冷凝物直接對受試細胞進行處理，能夠對卷煙煙氣冷凝物的致突變作用進行定性及定量的判斷，可簡單快捷的判斷卷煙的毒性作用，克服了現有技術中卷煙煙氣遺傳毒性檢測過程中遺傳毒性終點少、煙氣易陳化、表現毒性的劑量范圍較窄的問題，能夠適用于市場上的卷煙，并可以對卷煙煙氣的遺傳毒性進行定量的判斷，能夠實現不同卷煙TK基因致突變作用之間的橫向比較，應用范圍廣。

技術領域

本發明涉及適用于評價卷煙煙氣冷凝物遺傳毒性的TK基因突變測試方法、致突變強度確定方法，屬于卷煙危害評價技術領域。

背景技術

卷煙煙氣含有近5315種化合物，目前已確定有158種對人或實驗動物有毒性作用，如何評價卷煙煙氣的危害一直是國內外相關研究人員的攻克方向。2004年，國際煙草科學研究合作中心(Cooperation center for scientific research relation to tobacco，CORESTA)煙草煙氣體外毒性測試工作組推薦了三項體外毒性試驗來評價卷煙煙氣的危害，分別是細胞毒性試驗、鼠傷寒沙門氏菌回復突變試驗(Ames試驗)和體外微核試驗。

隨著卷煙煙氣危害性研究的深入，以及食品、食品添加劑、食品接觸材料等安全性評價的發展，CORESTA煙草煙氣體外毒性測試工作組多次提出了擴展原有三項體外毒性試驗的計劃。目前，國內外食品、食品添加劑、食品接觸材料用物質均將L5178Y tk^+/-3.7.2C小鼠淋巴瘤細胞(以下簡稱L5178Y細胞)的胸苷激酶位點(tk)突變檢測試驗(mouselymphoma assay，MLA)作為推薦或法定的遺傳毒性試驗之一，如《硫芥誘導L5178Y細胞tk基因突變的研究，李奇慧，第三軍醫大，200408》中采用了L5178Y細胞tk基因突變來檢測硫芥的致突變作用，其中也計算了PE0、PE2、RSG、RTG等值，最終得出結論，硫芥能誘發小鼠淋巴瘤L5178Y3.7.2C-tk^+/-細胞tk基因突變，有明確的致突變性；《馬兜鈴酸誘導小鼠淋巴瘤細胞tk基因突變的研究，徐斌，上海交通大學，200704》中也公開了該種方法可用于中藥中成分的檢測。同時，人用藥品注冊技術國際協調會議認為MLA比Ames 試驗或體外微核試驗能檢測更為廣泛的遺傳物質變異，同時，CORESTA也將MLA做為擴展的首選試驗。

雖然國內有食品、食品添加劑、食品接觸材料用物質相關的MLA方法，但卷煙煙氣與食品、食品添加劑、食品接觸材料用物質差別較大，無法直接拿來使用，如煙氣易陳化、表現毒性的劑量范圍較窄，因此建立適用于卷煙煙氣的MLA尤為迫切。

發明內容

本發明的目的是提供一種適用于評價卷煙煙氣冷凝物致突變作用的體外遺傳毒性測試方法，可以檢測煙氣冷凝物的致突變作用。

本發明還提供了一種卷煙煙氣冷凝物的致突變強度確定方法，該方法能夠對卷煙煙氣的致突變作用進行定量評價。

為了實現上述目的，本發明所采用的技術方案是：

一種適用于評價卷煙煙氣冷凝物致突變作用的體外遺傳毒性測試方法，包括如下步驟：收集卷煙煙氣冷凝物，制備得到系列濃度的卷煙煙氣冷凝物溶液；采用加入所述卷煙煙氣冷凝物溶液的細胞培養基染毒處理受試細胞，然后計算卷煙煙氣冷凝物的抗性突變頻率TMF，根據TMF值判斷卷煙煙氣冷凝物是否有TK基因的致突變作用。

本發明的適用于評價卷煙煙氣冷凝物致突變作用的體外遺傳毒性測試方法，將卷煙煙氣制備成卷煙煙氣冷凝物溶液，能夠較為方便的加入到細胞培養基中，直接地與受試細胞進行作用，能夠準確的體現卷煙煙氣冷凝物的致突變作用。克服了現有技術中卷煙毒性檢測過程中遺傳毒性終點少、煙氣易陳化、表現毒性的劑量范圍較窄的問題。