[發明專利]一種雙黃連口服制劑指紋圖譜測定方法

有效

• 申請號: 201810278928.4
• 申請日: 2018-03-30
• 公開（公告）號: CN108760903B
• 公開（公告）日: 2020-11-17
• 發明（設計）人: 高燕;呂凌;劉青;丁曉彥;趙渤年
• 申請（專利權）人: 山東中醫藥大學;山東省中醫藥研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 李桂存

1.一種雙黃連口服制劑指紋圖譜測定方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）對照品溶液的制備：稱取紫草酸、黃芩苷、連翹苷、丹皮酚、槲皮素、黃芩素、木犀草苷、隱綠原酸、新綠原酸、牛蒡子苷、咖啡酸、異連翹苷、連翹酯苷A、連翹酯苷B、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C、迷迭香酸、千層紙素、白楊素、漢黃芩苷、漢黃芩素對照品，用70%甲醇稀釋即得；

（2）供試品溶液制備：量取雙黃連樣品，置于25 mL容量瓶中，用70% 甲醇定容至刻度線，超聲 ，放冷，補重，過濾，取續濾液與丹皮酚供試液混勻，經微孔濾膜濾過，即得供試液；

（3）利用高效液相色譜-質譜進行分析檢測；

所述高效液相色譜的條件為：色譜柱Thermo Hypersil Gold aQ C₁₈：250 mm×4.6 mm，5μm；檢測波長：260 nm；柱溫：30℃；檢測時間：200 min；進樣量：10 μL；流動相為：乙腈-0.05%甲酸，梯度洗脫；

所述梯度洗脫為前半段梯度洗脫和后半段梯度洗脫：

所述前半段梯度洗脫條件：0~18min，3%ACN；18~30min，3%→6%ACN；30~70min，6→3%ACN；70~75min，3%→8%ACN；75~110min，8%→12%ACN ；110~170min，12% ACN；170~210 min，12%→18% ACN；

所述后半段梯度洗脫條件：0~15min，10%→13%ACN；15~65min，13%ACN；65~100min，13%→20%ACN；100~200min，20%→31% ACN。

2.根據權利要求1所述的雙黃連口服制劑指紋圖譜測定方法，其特征在于，所述對照品溶液用70%甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液。

3.根據權利要求1所述的雙黃連口服制劑指紋圖譜測定方法，其特征在于，所述供試品溶液的具體制備方法為：量取雙黃連樣品，其中口服液精密量取8mL，顆粒、膠囊內容物、含片均研細，過80目篩，分別取4g、0.64g、1.6g，置于25 mL容量瓶中，均相當于原藥材12g/25mL，用70% 甲醇定容至刻度線，超聲20 min ，放冷，補重，過濾，取續濾液與丹皮酚供試液混勻，經0.45 μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

4.根據權利要求1所述的雙黃連口服制劑指紋圖譜測定方法，其特征在于，所述續濾液同丹皮酚供試液的體積比為1：1。

5.根據權利要求1或4所述的雙黃連口服制劑指紋圖譜測定方法，其特征在于，所述丹皮酚供試液的濃度為55μg/mL；所述丹皮酚供試液以70% 甲醇溶解并定容制成濃度為55μg·mL^-1的內標溶液。

6.根據權利要求1所述的雙黃連口服制劑指紋圖譜測定方法，其特征在于，所述質譜的條件為：采用ESI離子源，在正、負離子電離模式下分別采集數據進行質譜檢測，離子阱質量分析器，質量掃描范圍：m/z 50～1500，毛細管電壓：4000 V+，3500 V-，干燥氣流速：9.0L·min^-1，干燥氣溫度：350 ℃，噴霧氣壓力：35.0 psi，碰撞氣：氦氣。