[發明專利]一種生物制品疫苗甲醛殘留量的測定方法

在審

• 申請號: 201810276527.5
• 申請日: 2018-03-30
• 公開（公告）號: CN108426847A
• 公開（公告）日: 2018-08-21
• 發明（設計）人: 付春杰;李莉;金燕斌;陳宏;朱長動;宋海巖;張丹;石瑩;孟令偉;張麗娜;楊柳;杜鑫;高曉慶;唐東雪;王博;程杰;曾曉敏;劉金偉
• 申請（專利權）人: 吉林冠界生物技術有限公司
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 齊云

本發明涉及一種生物制品疫苗甲醛殘留量的測定方法。所述方法包括a)供試品溶液配制；b)對照品溶液配制；c)將對照品溶液、供試品溶液分別加醋酸?醋酸銨緩沖液、乙酰丙酮試液，置水浴鍋恒溫水浴，冷水冷卻后測定吸光度計算即得；所述方法還包括測定結果的不確定度評定方法，包括：按照下述公式計算測定結果的合成標準不確定度：u＝[u²_(供試品)+u²_(對照品)+u²_{(甲醛標定)}+u²_{(醋酸?醋酸銨)}+u²_{(乙酰丙酮)}]^1/2；甲醛殘留量測定的擴展不確定度＝2u。本方法提供了規范化的疫苗產品甲醛殘留量的測定方法，并提供了其不確定度的分析方法。該不確定度的分析方法主要用于評價不同實驗室間檢測能力。

技術領域

本發明涉及測試計量分析領域，具體而言，涉及一種生物制品疫苗甲醛殘留量的測定方法。

背景技術

甲醛作為親電試劑，可與多種帶負電荷的生物大分子發生反應，形成可逆的加合物或不可逆的交聯物，如DNA、RNA和多糖。甲醛本身對機體具有較高的毒性，是公認的致癌、致畸和基因毒性物質，在我國有毒化學品優先控制名單上高居第二位。

RAMON等^[1]和GLENNY等^[2]發現，經福爾馬林處理后的白喉毒素的毒性可明顯降低，其機制可能為甲醛與蛋白質的氨基結合，使蛋白質凝固，進而有效的降低毒素毒性。自此之后，甲醛作為滅活劑被用于多種疫苗生產中。殘留的甲醛隨疫苗注入機體后，會對機體產生一系列刺激性反應，因此需對疫苗中甲醛殘留量進行嚴格控制。

乙酰丙酮法是甲醛測定的傳統方法，其基于分光光度法進行甲醛測定，儀器價格低，普及程度高，是甲醛測定的最常用的檢驗方法。該方法的原理在于甲醛在醋酸-醋酸銨緩沖溶液中，與乙酰丙酮反應生成黃色化合物3,5-二乙酰基-1,4-二氫吡啶，該化合物在410nm波長處有最大吸光度值，通過比色定量可計算疫苗中甲醛殘留量。然而，現有技術中目前尚未找到有關生物制品疫苗中甲醛殘留量標準流程化方法，并且其相關不確定度的確定方法也未見報道，因而難以對工作人員提供充分提供技術方法指導。

有鑒于此，特提出本發明。

[1]RAMON G.Sur la toxine et surranatoxine diphtheriques[J].Ann InstPasteur,1924,38(1):1-10.

[2]GLENNY AT,HOPKINS B E.Diphtheria toxoid as an immunizing agent[J].Br J Exp Pathol,1923,4(5):283-288.

發明內容

本發明涉及一種生物制品疫苗甲醛殘留量的測定方法，包括：

a)用5.0ml刻度移液管取被檢疫苗樣品5.0ml，置50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，強烈振搖，靜止分層，下層液如果不澄清，濾過，棄去初濾液，取澄清續濾液，得到供試品溶液；

b)用刻度移液管取已標定的甲醛溶液配成每l.0ml含甲醛1.0mg的溶液，精密量取上述稀釋溶液5.0ml置50ml容量瓶中，用10ml刻度移液管加20％吐溫-80乙醇溶液10ml，再加水至刻度，搖勻，得到對照品溶液；

其中，步驟a)和b)無先后順序；

c)用1.0ml刻度移液管精密吸取所述供試品溶液和所述對照品溶液各0.5ml，分別加醋酸-醋酸銨緩沖液10ml、乙酰丙酮試液10ml，置60℃水浴鍋恒溫水浴15分鐘，冷水冷卻5分鐘，放置20分鐘后，按紫外-可見分光光度法《中華人民共和國獸藥典》附錄，用紫外分光光度計在410nm的波長處測定吸收度，計算即得；

計算公式為：