[發明專利]苯丙氨酸羥化酶基因突變譜檢測的特異性引物

在審

• 申請號: 201810273204.0
• 申請日: 2018-03-29
• 公開（公告）號: CN108330190A
• 公開（公告）日: 2018-07-27
• 發明（設計）人: 龐永紅;彭磊;于洋
• 申請（專利權）人: 徐州市婦幼保健院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 徐州市三聯專利事務所 32220
• 代理人: 陳鵬

1.一種苯丙氨酸羥化酶基因突變譜檢測的特異性引物，其特征在于，包括13對引物，擴增區域為13個外顯子及其側翼區，引物序列分別為：

所述苯丙氨酸羥化酶基因C1位點，擴增區域為474-533，擴增引物序列是F1:acgaggggcgttactgtg和R1:ccaggaagcaccagcag；

所述苯丙氨酸羥化酶基因C2位點，擴增區域為4614-4863，擴增引物序列是F2:agagttcatgcttgctttg和R2:tggaagtttgctacgacat；

所述苯丙氨酸羥化酶基因C3位點，擴增區域為22600-22909，擴增引物序列是F3:gttaggttttcctgttctggt和R3:gtggagttacttatgttgca；

所述苯丙氨酸羥化酶基因C4位點，擴增區域為39910-40214，擴增引物序列是F4:ttgaacgatagtaatttggg和R4:aggtaagaggaagggag；

所述苯丙氨酸羥化酶基因C5位點，擴增區域為50823-51072，擴增引物序列是F5:accaagggaaggagacat和R5:caagggagaagcaggctag；

所述苯丙氨酸羥化酶基因C6位點，擴增區域為62189-62527，擴增引物序列是F6:ccccgactccctctgctaa和R6:cctctgcctcaatcctccc；

所述苯丙氨酸羥化酶基因C7位點，擴增區域64590-64874，擴增引物序列是F7:gtctcctagtgcctctgact和R7:gcaatgaacccaaacctc；

所述苯丙氨酸羥化酶基因C8位點，擴增區域65759-66029，擴增引物序列是F8:ctttctgcccattcctca和R8:tacctggtttccgctctt；

所述苯丙氨酸羥化酶基因C9位點，擴增區域70545-70748，擴增引物序列是F9:ctttctgcccattcctca和R9:tacctggtttccgctctt；

所述苯丙氨酸羥化酶基因C10位點，擴增區域73035-73438，擴增引物序列是F10:tccagaaacaccctcata和R10:cacagccatcatcaaatc；

所述苯丙氨酸羥化酶基因C11位點，擴增區域73972-73700，擴增引物序列是F11:ttgggctgtgatgtagaag和R11:tgtcaccacctcaccttact；

所述苯丙氨酸羥化酶基因C12位點，擴增區域77275-76978，擴增引物序列是F12:tagggaggtgtccgtgtt和R12:gcgatggtagggaaaga；

所述苯丙氨酸羥化酶基因C13位點，擴增區域78520-78309，擴增引物序列是F13:gctttgcactgaggacact和R13:aggtttgcttttcggacttt。

2.根據權利要求1所述的一種苯丙氨酸羥化酶基因突變譜檢測的特異性引物，其特征在于，所述苯丙氨酸羥化酶基因C1位點、C2位點、C3位點、C4位點、C5位點、C6位點、C7位點、C8位點、C9位點、C10位點、C11位點、C12位和C13位點的擴增引物序列，其退火溫度分別為64℃、60℃、60℃、58℃、59℃、64℃、59℃、50℃、57℃、55℃、60℃、61℃和62℃。

3.根據權利要求1所述的一種苯丙氨酸羥化酶基因突變譜檢測的特異性引物，其特征在于，所述苯丙氨酸羥化酶基因C1位點、C2位點、C3位點、C4位點、C5位點、C6位點、C7位點、C8位點、C9位點、C10位點、C11位點、C12位和C13位點的擴增引物序列，其分別依次位于Exon1、Exon2、Exon3、Exon4、Exon5、Exon6、Exon7、Exon8、Exon9、Exon10、Exon11、Exon12和Exon13及各外顯子側翼區。

4.一種權利要求1-3任一項所述檢測引物的應用，其特征在于，具體包括步驟：

1)利用PCR-SSCP確定PAH熱點突變區域；

2)利用PCR直接測序法，在步驟1)確定的熱點突變區域對全部樣本擴增，將PCR產物直接Sanger測序。