[發明專利]豬輪狀病毒VP融合蛋白重構體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201810271984.5
• 申請日: 2018-03-29
• 公開（公告）號: CN108359015B
• 公開（公告）日: 2020-09-22
• 發明（設計）人: 徐進平;姚帥
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K1/22;C12N15/62;C12N1/21;A61K39/15;A61P31/14;C12R1/19
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 彭勁松

本發明公開了豬輪狀病毒VP融合蛋白重構體及其制備方法和應用。本發明提供的融合蛋白VP8?VP7?TAT，包括豬輪狀病毒（PRV）外衣殼結構蛋白VP4的截斷片段VP8和VP7及結合在其C端的TAT蛋白轉導肽堿性氨基酸富集區的11個核心氨基酸。將融合蛋白VP8?VP7?TAT通過腹腔注射或口服灌胃的方式免疫小鼠，可有效誘導機體產生體液免疫應答和粘膜免疫應答，具有良好的免疫原性。因此，本發明將豬輪狀病毒蛋白VP8、VP7與TAT融合表達，為預防PRV感染提供了一種新的方法，也為豬輪狀病毒新型口服疫苗的開發奠定了基礎。

技術領域

本發明屬于基因生物工程技術領域，具體涉及豬輪狀病毒蛋白VP8和VP7與TAT構成的融合蛋白及其制備方法和應用。

背景技術

豬輪狀病毒是引起仔豬病毒性腹瀉的重要病原之一。由豬輪狀病毒感染所引起的仔豬腹瀉在全世界各個養豬國家均普遍存在。據報道，在英國仔豬群的發病率已超過80％，死亡率為0-50％。我國福建省福州、南平地區10日齡到斷奶前仔豬PRV感染的調查表明，感染率分別達到82.3％、91.7％(張雷,衛廣森.豬輪狀病毒感染研究進展[J].2005(4),42-44)，該病毒無論是單純感染或者混合感染在豬群中均普遍存在，由此給豬養殖業造成了巨大的經濟損失。

豬輪狀病毒(Porcine Rotavirus，PRV)是呼腸孤病毒科(Reoviridae)輪狀病毒屬(Rotavirus)的成員，為無囊膜、雙股RNA病毒。豬輪狀病毒感染是由豬輪狀病毒引起的主要以仔豬厭食、嘔吐、腹瀉、脫水和酸堿平衡紊亂為特征性癥狀的疾病。1975年Woode和Bridge首次從豬分離出輪狀病毒。此后，我國獸醫工作者又先后在仔豬、犢牛、羔羊等多種動物的糞便中檢測并分離到了輪狀病毒(程健頻,李昌銘,魏錦龍.仔豬輪狀病毒性腹瀉的調查與防治[J].甘肅畜牧獸醫,2005,35(5):28-29)。輪狀病毒粒子略呈圓形，具有雙層衣殼，直徑為65-75nm，核心直徑37-40nm，無鑲膜，具有雙層衣殼。PRV基因組由11個片段的雙股RNA組成，總長度為18Kb，各片段的分子量不等。在復制過程中，RNAs起兩個作用：①直接翻譯為蛋白質；②起模板作用，合成負鏈RNAs，進一步合成dsRNAs。現己鑒定出11種蛋白，分別由11個基因片段編碼合成。分屬于PRV內衣殼蛋白、外衣殼蛋白及非結構蛋白，它們決定病毒的感染性、免疫原性，并在影響病毒結構與功能方面起重要作用。其中6種為結構蛋白(VP1，VP2，VP3，VP4，VP6，VP7)，5種為非結構蛋白(NSPl，NSP2，NS34，NS35及NS28)。這11種蛋白中，VP1，VP2，VP3，NSP2，NS34，NS28為RNA結合蛋白，它們與基因組的復制、合成和表達有關(陳淑紅,王新生,師東方,等.豬輪狀病毒的分離鑒定及部分特性研究中國預防獸醫學報[J].2004,7:1)。