[發明專利]一種氨基糖苷類抗生素免疫親和柱及其制備方法和用途

在審

• 申請號: 201810269329.6
• 申請日: 2018-03-29
• 公開（公告）號: CN108479113A
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發明（設計）人: 柳家鵬;王濤;于蓉;龔利新
• 申請（專利權）人: 山東美正生物科技有限公司
• 主分類號: B01D15/20
• 分類號: B01D15/20;B01D15/22;B01D15/38;A23L5/20;G01N1/34;G01N1/40
• 代理公司: 青島高曉專利事務所(普通合伙) 37104
• 代理人: 白瑩;于正河

本發明屬于食品安全檢測技術領域，具體涉及一種氨基糖苷類抗生素免疫親和柱及其制備方法和用途，首先將采用環氧氯丙烷活化法活化的瓊脂糖凝膠作為載體，然后將基因重組蛋白G偶聯到載體上，得到了蛋白G?sepharose，再將氨基糖苷類抗生素抗體連接到蛋白G?sepharose上，得到了抗體—蛋白G—sepharose，再用交聯劑進行交聯，得到了抗體—蛋白G—sepharose填料，最后將抗體—蛋白G—sepharose填料裝柱后形成了高純度和親和力的氨基糖苷類抗生素免疫親和柱，充分利用基因重組蛋白G與氨基糖苷類抗生素抗體特異性結合的特點，氨基糖苷類抗生素抗體的Fab片段暴露在外，大幅度提高了基因重組蛋白G的抗體結合能力、氨基糖苷類抗生素的捕捉能力和氨基糖苷類抗生素的純化效率。

技術領域：

本發明屬于食品安全檢測技術領域，具體涉及一種氨基糖苷類抗生素免疫親和柱及其制備方法和用途。

背景技術：

親和柱是將與純化對象有專一結合作用的物質連接在不溶性載體上，制成親和吸附劑后所裝的柱，多用做親和層析。

氨基糖苷類(AGs)抗生素是由氨基環醇和氨基糖通過氧橋連接而成的苷類化合物,是抑制蛋白質合成、靜止期殺菌性抗生素，根據來源，氨基糖苷類抗生素分為天然的和半合成的兩種：天然氨基糖苷類抗生素主要為鏈霉菌(Streptomyces)和小單胞菌(Micromonospora)的次級代謝產物，英文名稱后綴一般分別為-mycin和-micin，如慶大霉素(gentamicin)、新霉素(neomycin)及卡那霉素(kanamycin)等，而半合成氨基糖苷類抗生素則是以天然氨基糖苷類抗生素為前體，經結構改造而得的，如阿米卡星、奈替米星、依替米星、異帕米星等。氨基糖苷類藥物是一個種類豐富的抗生素類別，因其能防治某些動物性疾病且能促進動物的生長發育，在養殖業中應用廣泛。但長期高劑量使用該類藥物，會因其降解困難對環境造成危害，并且可通過食物鏈傳遞給人。該類藥物能夠在人體內蓄積，從而產生耳毒性、腎毒性等危害。因AGs殘留對動物及人體存在危害，各國對常用的AGs的最大殘留限量(maximum residue limit，MRL)都有嚴格的規定，我國農業部對幾種常用的AGs也做出詳細的限量規定。

氨基糖苷類的檢測方法常用的有微生物法、理化法、HPLC法和酶聯免疫吸附分析法：微生物法可以檢測所有種類的AGs，并且成本低、操作簡單，在殘留量的篩選測試中是最佳選擇，Cazedey等采用微生物比濁法測定滴眼液中鹽酸環丙沙星的含量，檢測范圍是14.0-56.0μg/mL，隨著檢測方法研究的深入，微生物法因只能測定生物總效價，不能對主要成分進行定量，且影響因素眾多、靈敏度低等缺點而被取代；理化法有毛細管電泳法和薄層色譜(TLC)法，毛細管電泳法是指在高壓電場的驅動下，樣品通過毛細管實現分離，但是由于其進樣量較少，故制備能力較差，毛細管的直徑較小，降低了其靈敏度；TLC法是一種色譜分離方法，檢測前選擇合適的固定相均勻涂布在平板上，然后點樣，由于不同成分吸附能力有差別，樣品展開后，各成分相互分離,該法操作簡單，速度快，同時能夠分離多個樣品，成本較低，但對于沸點較低的物質，由于其易揮發而不適用；HPLC法因具有高壓、高速、高效、高靈敏度的特點，在AGs的檢測中得到了廣泛的應用，高壓即對流動相實施高壓以減小阻力，高速即分析的速度比經典色譜快，高效即分離的效能較高，高靈敏度即紫外檢測器的靈敏度可達0.01ng；酶聯免疫分析(ELISA)法ELISA法是目前AGs殘留檢測中應用較為廣泛的一種免疫學檢測方法，主要采用競爭ELISA模式，即酶標抗原或抗體與待測物競爭結合包被在固相載體上的抗體或抗原，加入顯色液(可被酶催化而顯色的物質)后根據顏色深淺對待測物進行定性和定量。ELISA法以其成本低、靈敏度高、特異性強等優點廣泛應用于AGs殘留的篩選檢測，但該方法也具有穩定性、重復性差，易出現基質效應和交叉反應等缺點。