[發(fā)明專利]一種氨基糖苷類抗生素免疫親和柱及其制備方法和用途

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810269329.6
• 申請(qǐng)日: 2018-03-29
• 公開（公告）號(hào): CN108479113A
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 柳家鵬;王濤;于蓉;龔利新
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東美正生物科技有限公司
• 主分類號(hào): B01D15/20
• 分類號(hào): B01D15/20;B01D15/22;B01D15/38;A23L5/20;G01N1/34;G01N1/40
• 代理公司: 青島高曉專利事務(wù)所(普通合伙) 37104
• 代理人: 白瑩;于正河

1.一種氨基糖苷類抗生素免疫親和柱，其特征在于主體結(jié)構(gòu)包括柱體、蓋板、進(jìn)樣口、第一篩板、填料、第二篩板和出樣口；圓管狀結(jié)構(gòu)的柱體的頂部設(shè)置有圓形片狀結(jié)構(gòu)的蓋板，蓋板的中心設(shè)置有圓管狀結(jié)構(gòu)的進(jìn)樣口，柱體的內(nèi)部上部空間為空腔，柱體的內(nèi)部中間設(shè)置有開設(shè)有篩孔的圓形片狀結(jié)構(gòu)的第一篩板，柱體的內(nèi)部下部空間填充有填料，柱體的底部設(shè)置有開設(shè)有篩孔的圓形片狀結(jié)構(gòu)的第二篩板，第二篩板上設(shè)置有上寬下窄的錐形管狀結(jié)構(gòu)的出樣口；填料為腹瀉性貝類毒素抗體-蛋白G-sepharose填料。

2.一種氨基糖苷類抗生素免疫親和柱制備方法，其特征在于具體工藝過(guò)程包括活化、偶聯(lián)、連接、交聯(lián)和裝柱共五個(gè)步驟：

(一)活化：用蒸餾水充分沖洗濃度為2％的預(yù)溶脹瓊脂糖凝膠sepharose4B，洗去瓊脂糖凝膠sepharose4B中殘存的乙醇，蒸餾水與瓊脂糖凝膠sepharose4B的體積比為20:1，用漏斗過(guò)濾掉液體，得到濕凝膠，稱取5克濕凝膠與7.5毫升摩爾質(zhì)量為0.8M的NaOH水溶液、2毫升質(zhì)量百分比濃度為30％的環(huán)氧氯丙烷水溶液和5毫升濃度為2mg/mL的NaBH₄水溶液在溫度為25℃的條件下下進(jìn)行8小時(shí)的搖床反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，用50毫升蒸餾水洗滌濕凝膠，洗去濕凝膠中混雜的環(huán)氧氯丙烷，完成瓊脂糖凝膠sepharose4B的活化，活化后的瓊脂糖凝膠sepharose4B作為載體備用；

(二)偶聯(lián)：取1克載體用偶聯(lián)緩沖液洗滌3次，將載體加入20毫升濃度為2mg/mL的基因重組蛋白G中在室溫條件下偶聯(lián)4小時(shí)，偶聯(lián)緩沖液選取為pH值為8.9的摩爾質(zhì)量為0.1M的NaHCO₃水溶液和摩爾質(zhì)量為0.8M的NaCl水溶液的混合液，將偶聯(lián)后的載體用pH值為7.4和濃度為20mM的PBS洗滌3次，得到偶聯(lián)有基因重組蛋白G的瓊脂糖凝膠sepharose4B，簡(jiǎn)稱為蛋白G-sepharose；

(三)連接：將氨基糖苷類抗生素抗體溶解于pH值為7.4和濃度為20mM的PBS中，得到10毫升濃度為2mg/mL的抗體，將蛋白G-sepharose用pH值為7.4和濃度為20mM的PBS洗滌3次，PBS的每次使用量為30毫升，將抗體加入到洗滌過(guò)的蛋白G-sepharose中在室溫條件下結(jié)合30分鐘，得到連接有抗體的蛋白G-sepharose，用pH值為7.4和濃度為20mM的PBS洗滌連接有抗體的蛋白G-sepharose 3次，PBS的每次使用量為30毫升，連接有抗體的蛋白G-sepharose簡(jiǎn)稱為抗體—蛋白G—sepharose；

(四)交聯(lián)：用pH值為9.0和濃度為0.1M的硼酸緩沖液洗滌抗體—蛋白G—sepharose 3次，硼酸緩沖液的每次使用量為30毫升，在抗體—蛋白G—sepharose中加入pH值為9.0和濃度為0.1M的硼酸緩沖液以及交聯(lián)劑，交聯(lián)劑為庚二亞氨酸二甲酯，當(dāng)抗體—蛋白G—sepharose的濃度為20mM時(shí)停止交聯(lián)劑的加入，使抗體—蛋白G—sepharose、硼酸緩沖液和交聯(lián)劑在室溫條件下交聯(lián)1小時(shí)，加入pH值為9.0和濃度為50mM的乙醇胺終止交聯(lián)，并用濃度為50mM的乙醇胺封閉10分鐘，用pH值為7.4和濃度為20mM的PBS洗滌交聯(lián)后的抗體—蛋白G—sepharose 3次，得到抗體—蛋白G—sepharose填料；

(五)裝柱：將用10毫升pH值為7.4和濃度為20mM的PBS重懸后的抗體—蛋白G—sepharose填料裝入到柱體1的下部空間中，得到氨基糖苷類抗生素免疫親和柱，完成氨基糖苷類抗生素免疫親和柱的制備；抗體—蛋白G—sepharose填料的裝入量根據(jù)需要制備的氨基糖苷類抗生素免疫親和柱的容量選取。