[發明專利]檢測抗小麥白粉病Pm57基因的通用分子標記、引物、檢測方法及應用

有效

• 申請號: 201810267752.2
• 申請日: 2018-03-29
• 公開（公告）號: CN108179223B
• 公開（公告）日: 2021-01-26
• 發明（設計）人: 劉文軒;董振杰;夏晴;麥艷娜;馬超;李歡歡
• 申請（專利權）人: 河南農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 俞曉明

1.一種檢測抗小麥白粉病Pm57基因的通用分子標記，其特征在于，所述通用分子標記為分子標記X185442，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一種用于擴增權利要求1所述通用分子標記的引物，其特征在于，所述引物的序列為：

上游引物185442F：5’-GCACGGTGGGTGTGTTCC-3’

下游引物185442R：5’-CTCACTATGATGTGTGAGGTTCTT-3’。

3.一種利用權利要求2中所述引物檢測抗小麥白粉病Pm57基因的方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

S1，提取待檢測小麥的基因組DNA；所述小麥為小麥-西爾斯山羊草染色體2S^S#1添加系2011-400和易位系89(6)88、89(5)69、89-346；

S2，以所述小麥的基因組DNA為模板，以上游引物185442F和下游引物185442R為引物進行PCR擴增；

S3，瓊脂糖凝膠電泳檢測：用1×TAE緩沖液和瓊脂糖配制濃度為3.0％的瓊脂糖凝膠，加入溴化乙錠至溴化乙錠終濃度為0.5μg/ml，在額定電壓150V下電泳70min，后用紫外光透射儀記錄觀察電泳結果；如果檢測到210bp的擴增條帶，則說明待測小麥的基因組DNA中含有特異分子標記X185442，且含有抗小麥白粉病Pm57基因；如果檢測不到210bp的擴增條帶，則說明待測小麥的基因組DNA中不含特異分子標記X185442，不含抗小麥白粉病Pm57基因。

4.根據權利要求3中所述引物檢測抗小麥白粉病Pm57基因的方法，其特征在于，所述PCR擴增使用的反應體系為：

基因組DNA 2μL，上游引物185442F 1.5μL，下游引物185442R 1.5μL，2×Es TapMaster Mix 7.5μL，ddH₂O 2.5μL；總體積15μL；上游引物185442F和下游引物185442R的濃度均為5μM；

所述PCR擴增使用的反應條件為：

94℃ 10min；

降落10個循環：

94℃ 20s

63℃→58.5℃ 20s，每個循環減0.5℃

72℃ 2min

繼續補充的35個循環：

94℃ 20s

58℃ 20s

72℃ 2min

終延伸：

72℃ 10min

16℃ forever。

5.根據權利要求1所述的通用分子標記在檢測小麥抗小麥白粉病Pm57基因或者在培育抗小麥白粉病小麥品種中的應用，其特征在于，所述小麥品種為小麥-西爾斯山羊草染色體2S^S#1添加系2011-400和易位系89(6)88、89(5)69、89-346。

6.根據權利要求2所述的引物在檢測小麥抗小麥白粉病Pm57基因或者在培育抗小麥白粉病小麥品種中的應用，其特征在于，所述小麥品種為小麥-西爾斯山羊草染色體2S^S#1添加系2011-400和易位系89(6)88、89(5)69、89-346。