[發明專利]糞便宿主DNA甲基化檢測方法

在審

• 申請號: 201810266872.0
• 申請日: 2018-03-28
• 公開（公告）號: CN108220286A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發明（設計）人: 羅海貝;王臣;趙然;馮俊;陳小鳳
• 申請（專利權）人: 上海銳翌生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6858
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 趙天月

1.一種提取糞便中宿主DNA的試劑組合物，其特征在于，包括：

提供硫酸根離子的裂解液A；以及

提供鈣離子的絮凝劑。

2.根據權利要求1所述的試劑組合物，其特征在于，所述裂解液A中含有硫酸銨，所述絮凝劑為氯化鈣溶液；

任選地，所述裂解液A包括：硫酸銨、硫氰酸胍、Tris-HCl、EDTA、CTAB和PVP-10，所述絮凝劑為0.5～2M的氯化鈣溶液；

優選地，所述裂解液A包括：

25～500mM的硫酸銨；

25～500mM的硫氰酸胍；

10～100mM的Tris-HCl，pH為5-8；

20～200mM的EDTA，pH為8.0；

0.5～2.5質量％的CTAB；以及

0.5～2.5質量％的PVP-10；

所述絮凝劑為0.5～1M的氯化鈣溶液；

更優選地，所述裂解液A包括：

50～100mM的硫酸銨；

50～100mM的硫氰酸胍；

20～50mM的Tris-HCl，pH為6.5-7.5；

40～50mM的EDTA，pH為8.0；

1.5～2.0質量％的CTAB；以及

1.5～2.0質量％的PVP-10。

3.根據權利要求1所述的試劑組合物，其特征在于，進一步包括：

裂解液B、蛋白消化液、結合液、DNA吸附載體、去雜質液A、去雜質液B和DNA溶解液；

任選地，所述裂解液B包括：硫氰酸胍、Tris-HCl和Triton X-100；

所述蛋白消化液為蛋白酶K溶液；

所述結合液為無水乙醇；

所述DNA吸附載體為硅羥基磁珠；

所述去雜質液A包括：硫氰酸胍、乙酸銨、Triton X-100、Tris-HCl和乙醇；

所述去雜質液B包括：乙酸銨、Tris-HCl和乙醇；

所述DNA溶解液為Tris-HCl；

優選地，

所述裂解液B包括：2～6M的硫氰酸胍；10～100mM的Tris-HCl，pH為5～8以及0.1～5質量％的Triton X-100；

所述蛋白消化液為10～50mg/ml的蛋白酶K溶液；

所述去雜質液A包括：1～2M的硫氰酸胍；20～200mM的乙酸銨；0.1～0.5質量％的Triton X-100；10～100mM的Tris-HCl，pH6～8以及40～70質量％的乙醇；

所述去雜質液B包括：5～50mM的乙酸銨溶液；5～50mM的Tris-HCl，pH6～8以及60～90質量％的乙醇；

所述DNA溶解液為5～25mM的Tris-HCl，pH8～9；

更優選地，

所述裂解液B包括：3.5～4.5M的硫氰酸胍；20～50mM的Tris-HCl，pH為5.5～6.5以及0.5～1質量％的Triton X-100；

所述蛋白消化液為15～25mg/ml的蛋白酶K溶液；

所述去雜質液A包括：2M的硫氰酸胍；25～50mM的乙酸銨；0.2～0.25質量％的TritonX-100；15～25mM的Tris-HCl，pH為6.8以及45～60質量％乙醇；

所述去雜質液B包括：10mM的乙酸銨、10mM的Tris-HCl，pH為6.8以及70～80質量％乙醇；

所述DNA溶解液為10mM的Tris-HCl，pH為8.5。