[發(fā)明專利]從螺旋藻中萃取藻藍(lán)蛋白的方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201810266698.X | 申請(qǐng)日： | 2018-03-28 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN108165600A | 公開（公告）日： | 2018-06-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 李祥麟;伏迪;蘭茹;汪永生;張馳 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 全家一百（蘇州）生物科技有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12P21/06 | 分類號(hào)： | C12P21/06;C07K1/30;C07K14/795 |
| 代理公司： | 南京利豐知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 32256 | 代理人： | 王鋒;趙世發(fā) |
| 地址： | 215000 江蘇省蘇州市工*** | 國(guó)省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說(shuō)明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 藻藍(lán)蛋白 螺旋藻 萃取 螺旋藻粉 剩余物 懸濁液 鹽析 聚丙烯酰胺凝膠電泳 規(guī)模化生產(chǎn) 木瓜蛋白酶 丙酮溶液 超聲混合 傳統(tǒng)提取 分級(jí)沉淀 離心處理 流程工藝 三氯乙酸 疏基乙醇 透析除鹽 研磨 復(fù)合酶 上清液 糖化酶 條帶 液氮 藻體 沉淀 清洗 新鮮 | ||
1.一種從螺旋藻中萃取藻藍(lán)蛋白的方法，其特征在于包括：
(1)取新鮮或干燥的螺旋藻的藻體于液氮中研磨形成螺旋藻粉，并加入螺旋藻粉2-3倍質(zhì)量的磷酸鹽緩沖液形成螺旋藻粉懸濁液；
(2)向所述螺旋粉懸濁液中加入木瓜蛋白酶和糖化酶組成的復(fù)合酶，先于pH為4-6、30-45℃水浴超聲溶解0.5-1.5h，再95-105℃水浴滅酶0.5-0.8h，然后60-80℃水浴浸提，棄上清液，獲得沉淀物；
(3)將步驟(2)中獲得的沉淀物采用30-50％的硫酸鹽和磷酸鹽形成的混合溶液分級(jí)沉淀，透析除鹽，獲得鹽析剩余物；
(4)將所述鹽析剩余物加-3-0℃去離子水反復(fù)清洗2-3次，之后加入含三氯乙酸和疏基乙醇的丙酮溶液超聲混合后于-20--10℃靜置1-2h，之后以1200-1500r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行第一次離心處理20-40min；棄上清液、加入疏基乙醇的丙酮溶液于-20--10℃靜置1-2h，之后以1200-1500r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行第二次離心處理20-40min，棄上清液、冷凍干燥沉淀；所述沉淀即藻藍(lán)蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述復(fù)合酶的體積濃度為0.5％～1％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述復(fù)合酶中木瓜蛋白酶和糖化酶的質(zhì)量比為1:1-1.5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述硫酸鹽包括硫酸銨和硫酸鈉；所述磷酸鹽包括磷酸銨和磷酸鈉。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(4)中所述鹽析剩余物與含三氯乙酸和疏基乙醇的丙酮溶液的用量比為0.3-0.5g：1-1.3mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于：所述三氯乙酸的質(zhì)量體積比濃度為8-12％；所述疏基乙醇的體積分?jǐn)?shù)為0.05-0.1％。
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