[發明專利]從螺旋藻中萃取藻藍蛋白的方法

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• 申請號: 201810266698.X
• 申請日: 2018-03-28
• 公開（公告）號: CN108165600A
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發明（設計）人: 李祥麟;伏迪;蘭茹;汪永生;張馳
• 申請（專利權）人: 全家一百（蘇州）生物科技有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/30;C07K14/795
• 代理公司: 南京利豐知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32256
• 代理人: 王鋒;趙世發

本發明公開了一種從螺旋藻中萃取藻藍蛋白的方法，其包括：(1)取新鮮或干燥的螺旋藻的藻體于液氮中研磨形成螺旋藻粉，形成螺旋藻粉懸濁液；(2)向螺旋粉懸濁液中加入木瓜蛋白酶和糖化酶組成的復合酶，棄上清液，獲得沉淀物；(3)將步驟(2)中獲得的沉淀物分級沉淀，透析除鹽，獲得鹽析剩余物；(4)將鹽析剩余物清洗之后加入含三氯乙酸和疏基乙醇的丙酮溶液超聲混合后靜置，之后經兩次離心處理，冷凍干燥沉淀。本發明提供的從螺旋藻中萃取藻藍蛋白的方法，流程工藝簡單，易于規?；a；相較于傳統提取方法，本發明提供的方法藻藍蛋白的獲取率高，所獲得的藻藍蛋白在聚丙烯酰胺凝膠電泳中形成條帶數目多，質量高。

技術領域

本發明特別涉及一種從螺旋藻中萃取藻藍蛋白的方法，屬于生物醫藥技術領域。

背景技術

螺旋藻中包含多種生物活性物質，其中藻膽蛋白在螺旋藻干粉中含量豐富(占15-25,w/w％)，并具有重要的醫藥、保健、生物工程等方面應用價值。對于我國螺旋藻產業中普遍養殖的鈍頂螺旋藻品系而言，其藻膽蛋白成分主要包含藻藍蛋白和別藻藍蛋白，二者在藻膽蛋白中的含量比例約為3：1，其中藻藍蛋白由于含量上的絕對優勢(約占螺旋藻干粉的10-20,w/w％)致使其研究應用更為普遍。藻藍蛋白不但在保健食品及醫藥領域具有抗輻射、抗癌、免疫調節、促進造血和延緩衰老等功能，據其純度的不同更廣泛地被應用于熒光探針和天然色素等生物工程、食品科學和精細化工等領域。然而由于螺旋藻藻膽蛋白中的藻藍蛋白分子和別藻藍蛋白分子的亞基之間氨基酸序列同源性很高，造成藻藍蛋白和別藻藍蛋白難以分離的技術瓶頸。

目前螺旋藻藻藍蛋白和別藻藍蛋白的分離純化通常采用羥基磷灰石介質進行層析分離，但存在吸附性弱、洗脫時間長、上樣量少等問題，并且還需結合其它多步層析操作如體積排阻層析和離子交換層析等進一步提高藻藍蛋白純度。

發明內容

本發明的主要目的在于提供一種從螺旋藻中萃取藻藍蛋白的方法，以克服現有技術的不足。

為實現前述發明目的，本發明采用的技術方案包括：

本發明實施例提供了一種從螺旋藻中萃取藻藍蛋白的方法，包括：

(1)取新鮮或干燥的螺旋藻的藻體于液氮中研磨形成螺旋藻粉，并加入螺旋藻粉2-3倍質量的磷酸鹽緩沖液形成螺旋藻粉懸濁液；

(2)向所述螺旋粉懸濁液中加入木瓜蛋白酶和糖化酶組成的復合酶，先于pH為4-6、30-45℃水浴超聲溶解0.5-1.5h，再95-105℃水浴滅酶0.5-0.8h，然后60-80℃水浴浸提，棄上清液，獲得沉淀物；

(3)將步驟(2)中獲得的沉淀物采用30-50％的硫酸鹽和磷酸鹽形成的混合溶液分級沉淀，透析除鹽，獲得鹽析剩余物；

(4)將所述鹽析剩余物加-3-0℃去離子水反復清洗2-3次，之后加入含三氯乙酸和疏基乙醇的丙酮溶液超聲混合后于-20--10℃靜置1-2h，之后以1200-1500r/min的轉速進行第一次離心處理20-40min；棄上清液、加入疏基乙醇的丙酮溶液于-20--10℃靜置1-2h，之后以1200-1500r/min的轉速進行第二次離心處理20-40min，棄上清液、冷凍干燥沉淀；所述沉淀即藻藍蛋白。

與現有技術相比，本發明的優點包括：本發明提供的從螺旋藻中萃取藻藍蛋白的方法，流程工藝簡單，易于規?；a；相較于傳統提取方法，本發明提供的方法藻藍蛋白的獲取率高，所獲得的藻藍蛋白在聚丙烯酰胺凝膠電泳中形成條帶數目多，質量高。

具體實施方式

鑒于現有技術中的不足，本案發明人經長期研究和大量實踐，得以提出本發明的技術方案。如下將對該技術方案、其實施過程及原理等作進一步的解釋說明。

本發明實施例提供了一種從螺旋藻中萃取藻藍蛋白的方法，包括：