[發(fā)明專利]一種用于研究細菌中類泛素系統(tǒng)的試劑盒及其應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810265138.2 | 申請日： | 2018-03-28 |
| 公開（公告）號： | CN108414772B | 公開（公告）日： | 2021-02-09 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 徐西兵;沈國民;曹青;沈滟 | 申請（專利權(quán)）人： | 河南科技大學(xué) |
| 主分類號： | C12Q1/25 | 分類號： | C12Q1/25;G01N33/68 |
| 代理公司： | 鄭州睿信知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41119 | 代理人： | 張兵兵 |
| 地址： | 471003 河*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 用于 研究 細菌 中類泛素 系統(tǒng) 試劑盒 及其 應(yīng)用 | ||
本發(fā)明涉及一種用于研究細菌中類泛素系統(tǒng)的試劑盒及其應(yīng)用，屬于生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的試劑盒包括ThiS蛋白和ThiF蛋白，還可以包括MgCl2和Tris?HCl反應(yīng)緩沖液、DTT和ATP。ThiF蛋白具有連接酶的功能，在體外，在存在ATP時，可以將ThiS蛋白連接到底物蛋白上，形成類泛素化修飾，并且這種類泛素化修飾具有底物選擇性，F(xiàn)tsA和PriC能夠被ThiS蛋白和ThiF蛋白修飾，而MoaC不能。本發(fā)明的試劑盒可以有效的研究底物的類泛素化修飾情況，方便快捷效率高。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種用于研究細菌中類泛素系統(tǒng)的試劑盒及其應(yīng)用，屬于生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)
大腸桿菌類泛素蛋白ThiS是分子量7.2kDa的小分子蛋白，它的結(jié)構(gòu)與泛素蛋白非常相似，它們都有五個β折疊片，兩個α螺旋，之前研究發(fā)現(xiàn)它參與維生素B1的合成(Iyer,L.M.,Burroughs,A.M.Aravind,L.The prokaryotic antecedents of the ubiquitin-signaling system and the early evolution of ubiquitin-likeβ-graspdomains.Genome Biology 7,91-96(2006))。在體內(nèi)ThiS和ThiF蛋白主要參與維生素B1的合成，ThiF能夠?qū)hiSC末端的兩個GG活化，隨后參與硫轉(zhuǎn)運過程，ThiF蛋白在維生素B1合成時，主要功能是腺苷酰化ThiS蛋白(激活功能)，能夠?qū)hiS攜帶的硫轉(zhuǎn)運給下游蛋白，ThiF蛋白與泛素系統(tǒng)的E1激活酶類似(Lehmann,C.,Begley,T.P.Ealick,S.E.Structureof the Escherichia coli ThiS-ThiF complex,a key component of the sulfurtransfer system in thiamin biosynthesis.Biochemistry 45,11-19(2006),Xibing,X.et al.Heat shock transcription factorδ(32)is targeted for degradation viaan ubiquitin-like protein ThiS in Escherichia coli.BiochemicalBiophysicalResearch Communications 459,240-245(2015))。
目前，通過基因工程技術(shù)，微生物可以高效地將可再生碳水化合物轉(zhuǎn)化為各種有用產(chǎn)品，如檸檬酸、維生素、氨基酸、溶劑、抗生素、酶制劑、生物殺蟲劑、生物染色劑、生物表面活性劑、生物堿、類固醇等等，對國民經(jīng)濟所作的貢獻令人矚目。而這些產(chǎn)物的合成往往涉及各種酶的參與，研究微生物蛋白質(zhì)(包括酶)翻譯后修飾為提高代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量提供理論依據(jù)，泛素化修飾即為一種重要的翻譯后修飾過程。
大腸桿菌是常用的基因工程菌株，其遺傳背景清楚，技術(shù)操作簡單，培養(yǎng)條件簡單，可以實現(xiàn)大規(guī)模發(fā)酵經(jīng)濟，因此倍受遺傳工程專家的重視。例如利用大腸桿菌能夠表達人胰島素，抗菌蛋白等，但是在表達外源蛋白時其表達量和可溶性往往較差，目前有研究發(fā)現(xiàn)在胰島素的N末端融合類泛素蛋白ThiS，能夠提高其可溶性，但是原因不清楚(Yuan,S.,et al.,Prokaryotic ubiquitin-like ThiS fusion enhances the heterologousprotein overexpression and aggregation in Escherichia coli.PloS one,2013.8(4):p.e62529)。為了擴展ThiS蛋白的應(yīng)用范圍，需要對ThiS蛋白在體外類泛素系統(tǒng)的作用加以研究。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種用于研究細菌中類泛素系統(tǒng)的試劑盒，該試劑盒可以方便的用于底物蛋白的體外泛素化研究。
本發(fā)明還提供了上述試劑盒在研究體外類泛素化系統(tǒng)中的應(yīng)用。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：
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