[發明專利]一種用于研究細菌中類泛素系統的試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201810265138.2
• 申請日: 2018-03-28
• 公開（公告）號: CN108414772B
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發明（設計）人: 徐西兵;沈國民;曹青;沈滟
• 申請（專利權）人: 河南科技大學
• 主分類號: C12Q1/25
• 分類號: C12Q1/25;G01N33/68
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119
• 代理人: 張兵兵

1.一種用于研究細菌中類泛素系統的試劑盒，其特征在于：包括ThiS蛋白和ThiF蛋白，或者包括用于表達ThiS蛋白和ThiF蛋白的載體或菌種，還包括反應緩沖液、DTT和ATP，所述反應緩沖液中包括MgCl₂和Tris-HCl，所述反應緩沖液中MgCl₂和Tris-HCl的摩爾濃度比為2.3-2.7：45-55；所述ThiS蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，ThiF蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述ThiS蛋白和ThiF蛋白由基因工程的方法制備得到，具體為：將thiS基因和thiF基因分別克隆到表達載體pET28-a中，轉化到大腸桿菌中，誘導表達、純化即得。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述用于表達ThiS蛋白和ThiF蛋白的載體中包含thiS基因和/或thiF基因。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述用于表達ThiS蛋白和ThiF蛋白的菌種中包含具有thiS基因和/或thiF基因的載體。

5.如權利要求1所述的試劑盒在研究體外類泛素化系統中的應用。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于：將底物蛋白、ThiS蛋白和ThiF蛋白加入到使用濃度的反應緩沖液中，然后加入ATP和DTT，于28-32℃反應4-6h。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于：所述ThiS蛋白、ThiF蛋白和底物蛋白的質量濃度比為4：2-4：1-4。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于：所述ThiS蛋白的使用濃度為0.15-0.25 μg/μL。